اتیل مالتول به طور گسترده در صنایع غذایی به عنوان یک تقویتکننده و اصلاحکننده طعم بسیار کارآمد و با طیف وسیع استفاده میشود تا طعمهای شیرین، میوهای و خامهای را در محصولات غذایی تشدید و هماهنگ کند. طبق استاندارد ملی ایمنی مواد غذایی چین برای استفاده از افزودنیهای غذایی (GB 2760-2024)، اتیل مالتول مجاز است در سطوح مناسب و با توجه به نیازهای تولید در دستههای غذایی خاص استفاده شود.
با این حال، از آنجایی که اتیل مالتول میتواند به طور موثری طعمهای نامطلوب اکسیداتیو در روغنها را بپوشاند و طعم آنها را افزایش دهد، در سالهای اخیر حوادث مکرری در رابطه با افزودن غیرمجاز آن به روغنهای نباتی خوراکی، از جمله روغن سویا، رخ داده است. بنابراین، ایجاد یک روش تحلیلی دقیق، حساس و کارآمد برای نظارت بر افزودن غیرقانونی اتیل مالتول در روغن سویا و سایر روغنهای خوراکی از اهمیت عملی قابل توجهی برای اطمینان از ایمنی مواد غذایی، حفظ حقوق مصرفکنندگان و حفظ نظم بازار برخوردار است.
روغن سویا دارای ترکیب ماتریکس پیچیدهای است که عمدتاً از تریگلیسیریدها، اسیدهای چرب آزاد، فسفولیپیدها و توکوفرولهای طبیعی تشکیل شده است. این اجزای همزیست میتوانند تداخل قابل توجهی در ماتریکس در طول تجزیه و تحلیل ایجاد کنند و به شدت بر تشخیص آنالیت هدف، اتیل مالتول، تأثیر بگذارند. کروماتوگرافی مایع-طیفسنجی جرمی متوالی، قابلیت جداسازی عالی کروماتوگرافی مایع را با گزینشپذیری بالا و حساسیت بالای طیفسنجی جرمی متوالی ترکیب میکند. این تکنیک به یک ابزار قدرتمند برای تجزیه و تحلیل و شناسایی افزودنیهای غیرقانونی ردیابی در محصولات غذایی تبدیل شده است.
کلمات کلیدی:LCMS، روغن سویا، اتیل مالتول.
1. ابزار و معرفها
1.1 لیست پیکربندی LCMS
جدول 1 لیست پیکربندی ابزار
| شماره. |
ماژول |
تعداد |
| 1 |
سیستم طیفسنجی جرمی متوالی کروماتوگرافی مایع LCMS-TQ9200 |
1 |
| 2 |
پمپ جریان ثابت با فشار بالا باینری P3600B |
1 |
| 3 |
آون ستون CT3600 |
1 |
| 4 |
نمونهبردار خودکار عملکرد فوقالعاده AS3600 |
1 |
| 5 |
سیستم داده کروماتوگرافی SmartLab CDS 2.0 |
1 |
| 6 |
C18 1.7μm 2.1×50mm |
1 |
1.2 معرفها و استانداردها
جدول 2 جدول معرفها و استانداردها
|
شماره.
|
معرف و استاندارد
|
خلوص/درجه
|
| 1 |
متانول |
درجه LC-MS |
| 2 |
اسید فرمیک |
درجه LC-MS |
| 3 |
محلول استاندارد اتیل مالتول |
100 میلیگرم در لیتر |
| 4 |
روغن سویا با نام تجاری |
1 کیلوگرم |
1.3 مواد آزمایشی و تجهیزات کمکی
تمیزکننده اولتراسونیک
مخلوطکن ورتکس
سانتریفیوژ با سرعت بالا
2. روش آزمایش
2.1 شرایط کروماتوگرافی مایع
ستون: C18، 1.7 میکرومتر، 2.1×50 میلیمتر
فاز متحرک: A: 0.1٪ اسید فرمیک در آب؛ B: 0.1٪ اسید فرمیک در متانول
سرعت جریان: 0.3 میلیلیتر در دقیقه
دمای ستون: 40 درجه سانتیگراد
حجم تزریق: 2 میکرولیتر
2.2 روش پیشتیمار
10 گرم از نمونه را دقیقاً وزن کنید (تا 0.01 گرم دقیق) و آن را به یک لوله سانتریفیوژ پلیپروپیلن 50 میلیلیتری منتقل کنید. 10 میلیلیتر متانول را با استفاده از پیپت دقیقاً اضافه کنید، به مدت 2 دقیقه ورتکس کنید و به مدت 10 دقیقه در دمای 4 درجه سانتیگراد با سرعت 9000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید. سوپرناتانت را به یک لوله آزمایش 20 میلیلیتری با درپوش مدرج منتقل کنید. استخراج لایه روغن باقیمانده را با 10 میلیلیتر دیگر متانول تکرار کنید، سوپرناتانتها را ترکیب کنید و با متانول به 20 میلیلیتر رقیق کنید. محلول را از طریق یک غشای میکروپور (0.22 میکرومتر، فاز آلی) فیلتر کنید و از آن برای تجزیه و تحلیل کروماتوگرافی مایع-طیفسنجی جرمی متوالی استفاده کنید.
2.3 تهیه محلول
2.3.1 محلول استاندارد اتیل مالتول: 100 میکروگرم در میلیلیتر
2.3.2 محلولهای کاری استاندارد اتیل مالتول:محلول استوک استاندارد اتیل مالتول را به صورت پلهای با متانول رقیق کنید تا محلولهای استاندارد با غلظتهای 1.25 میکروگرم در میلیلیتر، 2.5 میکروگرم در میلیلیتر، 5 میکروگرم در میلیلیتر، 25 میکروگرم در میلیلیتر و 50 میکروگرم در میلیلیتر تهیه شود. 10 گرم (دقیق تا 0.01 گرم) از یک نمونه منفی متناظر با نمونه آزمایشی را دقیقاً وزن کنید، 200 میکرولیتر از هر محلول استاندارد را جداگانه اضافه کنید و مخلوطها را همزمان با نمونههای آزمایشی از طریق استخراج پردازش کنید. سپس محلولهای کاری را با غلظتهای نهایی 12.5 نانوگرم در میلیلیتر، 25 نانوگرم در میلیلیتر، 50 نانوگرم در میلیلیتر، 250 نانوگرم در میلیلیتر و 500 نانوگرم در میلیلیتر تهیه کنید. این محلولها را بلافاصله قبل از استفاده تهیه کنید.
2.3.3 محلول آبی 0.1٪ اسید فرمیک:1 میلیلیتر اسید فرمیک بردارید و با آب به 1000 میلیلیتر رقیق کنید. قبل از استفاده از طریق یک غشا (0.22 میکرومتر، فاز آبی) فیلتر کنید.
2.3.4 0.1٪ اسید فرمیک در محلول متانول:1 میلیلیتر اسید فرمیک بردارید و با متانول به 1000 میلیلیتر رقیق کنید. قبل از استفاده از طریق یک غشا (0.22 میکرومتر، فاز آلی) فیلتر کنید.
3. نتیجه آزمایش
3.1 کروماتوگرام استاندارد
تعیین مقدار اتیل مالتول در عرض 7 دقیقه تکمیل شد، با شکل پیک خوب و پاسخ ترکیبی، که الزامات تجزیه و تحلیل تجربی را برآورده میکند.
شکل 1 کروماتوگرام اتیل مالتول (250 نانوگرم در میلیلیتر)
3.2 محدوده خطی
منحنی استاندارد از طریق رقت متوالی محلول استاندارد اتیل مالتول تهیه شد. محدوده خطی 12.5 تا 500 نانوگرم در میلیلیتر بود، با انحرافات بین نتایج تشخیص خطی و غلظتهای شناخته شده کمتر از حداکثر انحراف مجاز. تمام مقادیر R² از 0.9999 فراتر رفتند که نشاندهنده خطی بودن عالی است.
جدول 3 جدول محدوده خطی ترکیبات
|
ترکیب
|
محدوده خطی
|
ضریب همبستگی خطی R2
|
| اتیل مالتول |
12.5 تا 500 نانوگرم در میلیلیتر |
0.99997 |
شکل 2 نتایج خطی ترکیبات
3.3 LOD و LOQ
در این روش، نسبت سیگنال به نویز (S/N) اتیل مالتول در 12.5 نانوگرم در میلیلیتر به طور قابل توجهی بیشتر از 10 است. هنگامی که S/N = 10 به عنوان حد نظری کمیسازی (LOQ) تعریف میشود و S/N = 3 به عنوان حد نظری تشخیص (LOD) تعریف میشود. حد تشخیص (LOD) محاسبه شده 1.07 نانوگرم در میلیلیتر و حد کمیسازی (LOQ) 3.56 نانوگرم در میلیلیتر است.
جدول 4 LOQ و LOQ ترکیبات
|
ترکیب
|
نسبت سیگنال به نویز (S/N)
|
حد تشخیص (نانوگرم در میلیلیتر)
|
حد کمیسازی (نانوگرم در میلیلیتر)
|
| اتیل مالتول |
35.079 |
1.07 |
3.56 |
شکل 3 کروماتوگرام ترکیبات LOQ
3.4 دقت
حلال خالی و نمونههای منفی را به محلول استاندارد اتیل مالتول ببرید تا غلظت نهایی 25 نانوگرم در میلیلیتر تهیه شود و به طور متوالی برای 7 تکرار تزریق شود تا دقت ارزیابی شود. نتایج در جدول زیر نشان داده شده است. RSD اتیل مالتول در 3٪ بود که الزامات دقت استاندارد ≤15٪ را برآورده میکند.
جدول 5 دقت ترکیبات
|
ترکیب
|
نمونه
|
RSD
|
| اتیل مالتول |
متانول اسپایک شده |
2.407٪ |
| روغن سویا اسپایک شده |
2.915٪ |
شکل 4 کروماتوگرام دقت نمونه اسپایک شده متانول
شکل 5 کروماتوگرام دقت نمونه اسپایک شده روغن سویا
3.5 میزان بازیابی
محلول استاندارد اتیل مالتول 100 میکروگرم در میلیلیتر با روغن سویا به 25 نانوگرم در میلیلیتر رقیق شد. پس از پیشتیمار نمونه، استخراج و فیلتراسیون، هفت تزریق متوالی انجام شد تا میزان بازیابی مقایسه شود. نتایج در جدول زیر نشان داده شده است. میزان بازیابی اتیل مالتول 102.53٪ بود که محدوده بازیابی قابل قبول 80٪ تا 120٪ را برآورده میکند.
جدول 6 میزان بازیابی ترکیبات
|
ترکیب
|
غلظت اسپایک شده (نانوگرم در میلیلیتر)
|
بازیابی (%)
|
| اتیل مالتول |
25 |
102.53٪ |
3.6 باقیمانده خالی
پس از تزریق بالاترین نقطه (500 نانوگرم در میلیلیتر) منحنی استاندارد، یک معرف خالی تزریق شد. پس از محاسبه، هیچ انتقال خالی تشخیص داده نشد.
شکل 6 کروماتوگرام باقیمانده خالی
3.7 آزمایش نمونه
پس از پیشتیمار، یک نمونه از یک برند خاص روغن سویا تزریق شد و هیچ ترکیب هدفی تشخیص داده نشد.
شکل 7 کروماتوگرام آزمایش نمونه
4. نتیجهگیری
این روش از سیستم طیفسنجی جرمی متوالی کروماتوگرافی مایع LCMS-TQ9200 Wayeal برای تعیین اتیل مالتول در روغن سویا استفاده میکند. دادهها نشان میدهند که پیکهای کروماتوگرافی این روش شکل پیک خوبی را بدون دمزدگی نشان میدهند و حساسیت الزامات را برآورده میکند. ضرایب همبستگی خطی همگی بیشتر از 0.9999 هستند، دقت در 3٪ است و میزان بازیابی اسپایک بین 100٪ تا 105٪ است. هیچ انتقال سیستمی برای نمونههای با غلظت بالا مشاهده نشد. این نتایج نشان میدهند که این روش، مجهز به سیستم LC-MS/MS Wayeal، الزامات تشخیص کیفی و کمی معمول را برای آنالیت هدف در نمونهها برآورده میکند.
سیستم طیفسنجی جرمی کروماتوگرافی مایع (LC-MS/MS) TQ9200
دستگاه کروماتوگرافی مایع HPLC با تکرار تزریق بالا LC3400 75MPa
سیستم HPLC با فشار بالا ایزواکراتیک 42MPa در صنعت داروسازی
پیام شما باید بین 20 تا 3000 کاراکتر باشد!
english
français
Deutsch
Italiano
Русский
Español
português
Nederlandse
ελληνικά
日本語
한국
العربية
हिन्दी
Türkçe
indonesia
tiếng Việt
ไทย
বাংলা
فارسی
polski
