این یادداشت کاربردی، استفاده از سیستم کروماتوگرافی یونی Wayeal را برای تعیین گوانیدینو استیک اسید و ناخالصیهای مرتبط در افزودنیهای خوراک توصیف میکند. عملکرد اصلی افزودنیهای خوراک، بهبود عملکرد خوراک و افزایش بهرهوری تولید دام از طریق مکملهای سطح ردیابی است.
ترکیب افزودنیهای خوراک تحت کنترل بسیار دقیقی قرار دارد تا از ایمنی، اثربخشی و انطباق با مقررات اطمینان حاصل شود. آنها باید دقیقاً مطابق با استانداردهای تعیین شده، با نسبتهای دقیق بر اساس دستورالعملهای محصول و نیازهای تغذیهای حیوانات اضافه شوند. افزودن بیش از حد ممکن است منجر به سمیت شود، در حالی که افزودن ناکافی آنها را بیاثر میکند. افزودن غیرقانونی هرگونه ماده اکیداً ممنوع است.
طبق مقررات اداری خوراک و افزودنیهای خوراک، افزودن مستقیم هورمونها، مواد شیمیایی تأیید نشده و مواد اولیه دارویی دام اکیداً ممنوع است. کنترل کیفیت خوراک از طریق آزمایش مواد اولیه و محصولات نهایی تضمین میشود. تعیین دقیق محتوا، پشتیبانی دادههای فنی را برای شرکتها فراهم میکند.
کلیدواژهها: کروماتوگرافی یونی، آشکارساز UV، افزودنیهای خوراک.
1. تجهیزات و معرفها
1.1 لیست پیکربندی کروماتوگراف یونی
جدول 1 لیست پیکربندی تجهیزات
|
شماره.
|
ماژولار
|
تعداد
|
| 1 |
سیستم کروماتوگرافی یونی سری IC6200 با آشکارساز UV |
1 |
| 2 |
نمونهگیر خودکار AS3100 |
1 |
| 3 |
ایستگاه کاری کروماتوگرافی SmartLab CDS 2.0 |
1 |
| 4 |
MS-5C-P2، 4.6×250 میلیمتر |
1 |
1.2 معرفها و استانداردها
جدول 2 لیست معرفها و استانداردها
|
شماره.
|
معرفها / استانداردها
|
خلوص
|
| 1 |
استانداردهای مایع گوانیدینو استیک اسید (GAA) |
507.03 میلیگرم بر لیتر |
| 2 |
استانداردهای مایع سیانامید |
1081.29 میلیگرم بر لیتر |
| 3 |
استانداردهای مایع دی سیان دی آمید |
1107.72 میلیگرم بر لیتر |
| 4 |
استانداردهای مایع گلیسین |
1344.10 میلیگرم بر لیتر |
1.3 مواد آزمایش و تجهیزات کمکی
فیلتر سرنگ از پیش پر شده، آبدوست، 0.45 میکرومتر
سرنگ (20 میلیلیتر)
2. روش آزمایش
2.1 پیشتصفیه نمونه
0.2 گرم از نمونه خشک را با دقت در یک بشر 250 میلیلیتری وزن کنید. 100 میلیلیتر آب فوق خالص اضافه کنید و بشر را به مدت 30 دقیقه در حمام اولتراسونیک قرار دهید. این روش استخراج را 3 تا 4 بار تکرار کنید. عصاره ترکیبی را به طور کمی در یک فلاسک حجمی 1000 میلیلیتری منتقل کنید، با آب فوق خالص تا علامت رقیق کنید و کاملاً مخلوط کنید. محلول نمونه آماده شده سپس هم بدون رقیقسازی و هم پس از رقیقسازی 10 برابری استفاده میشود. بخش مناسبی از هر محلول قبل از تزریق به دستگاه برای تجزیه و تحلیل از فیلتر غشایی 0.22 میکرومتر عبور داده میشود.
2.2 شرایط آزمایش
جدول 3 شرایط کروماتوگرافی
| ستون کروماتوگرافی |
MS-5C-P2، 4.6 × 250 میلیمتر |
| الوت |
الوت گرادیان 8-35 میلیمولار MSA |
| نرخ جریان |
1 میلیلیتر بر دقیقه |
| زمان اجرا |
60 دقیقه |
| حجم تزریق |
10 میکرولیتر |
| دمای ستون |
40 درجه سانتیگراد |
| دمای سلول |
45 درجه سانتیگراد |
| طول موج |
200 نانومتر |
3. نتایج آزمایش
3.1 کروماتوگرام استانداردها
تجزیه و تحلیل در عرض 60 دقیقه تکمیل میشود و خطی بودن خوب و تکرارپذیری خطی عالی را نشان میدهد. حدود تشخیص (LOD) و کمیتسنجی (LOQ) عالی هستند و تکرارپذیری نمونه رضایتبخش است و الزامات آزمایش را برآورده میکند.
شکل 1 کروماتوگرامهای همپوشان استانداردهای کالیبراسیون
3.2 محدوده خطی
حجمهای مناسبی از محلولهای استاندارد گرفته شده و برای ساخت منحنیهای کالیبراسیون رقیق شدند. انحراف نتایج تست خطی از غلظتهای شناخته شده در حد انحراف مجاز حداکثر بود. ضریب همبستگی (R) برای همه آنالیتها بالای 0.999 بود که نشاندهنده خطی بودن عالی است.
جدول 4 محدودههای خطی برای هر آنالیت
|
آنالیت
|
محدوده خطی
|
ضریب همبستگی (R)
|
| گوانیدینو استیک اسید |
10-100 میلیگرم بر لیتر |
0.99994 |
| سیانامید |
2.5-80 میلیگرم بر لیتر |
0.99996 |
| دی سیان دی آمید |
0.1-1 میلیگرم بر لیتر |
0.99919 |
| گلیسین |
5-100 میلیگرم بر لیتر |
1.00000 |
شکل 2 نتایج خطی بودن برای هر آنالیت
3.3 تست تکرارپذیری خطی
شکل 3 کروماتوگرامهای همپوشان 8 تزریق متوالی از پایینترین استاندارد کالیبراسیون (S1) برای تست تکرارپذیری.
شکل 4 کروماتوگرامهای همپوشان 8 تزریق متوالی از استاندارد کالیبراسیون نقطه میانی (S3) برای تست تکرارپذیری
شکل 5 کروماتوگرامهای همپوشان 8 تزریق متوالی از بالاترین استاندارد کالیبراسیون (S7) برای تست تکرارپذیری
جدول 5 دادههای تست تکرارپذیری منحنی کالیبراسیون
|
ترکیب
|
نقطه کالیبراسیون
|
زمان ماند (دقیقه) انحراف معیار نسبی (%)
|
مساحت پیک (میکرو ثانیه*ثانیه) انحراف معیار نسبی (%)
|
| گوانیدینو استیک اسید |
S1 |
0.282 |
0.28 |
| S3 |
0.22 |
0.754 |
| S6 |
0.284 |
0.28 |
| سیانامید |
S1 |
0.268 |
0.143 |
| S3 |
0.257 |
0.046 |
| S6 |
0.352 |
0.118 |
| دی سیان دی آمید |
S1 |
0.811 |
0.396 |
| S3 |
0.706 |
0.043 |
| S6 |
0.906 |
0.027 |
| گلیسین |
S1 |
0.221 |
0.263 |
| S3 |
0.171 |
0.101 |
| S6 |
0.232 |
0.035 |
3.4 تست حد تشخیص (LOD)
شکل 6 کروماتوگرام تست حد تشخیص برای گوانیدینو استیک اسید
جدول 6 دادههای تست حد تشخیص (LOD) و حد کمیتسنجی (LOQ) گوانیدینو استیک اسید
|
ترکیب
|
غلظت (میلیگرم بر لیتر)
|
نسبت سیگنال به نویز (S/N)
|
ارتفاع پیک (میکرو ثانیه)
|
نویز (میکرو ثانیه)
|
LOD نظری (میلیگرم بر لیتر)
|
LOQ نظری (میلیگرم بر لیتر)
|
| گوانیدینو استیک اسید |
0.01 |
34.844 |
0.124 |
0.007 |
0.001 |
0.003 |
3.5 تست LOD و LOQ برای ناخالصیها
شکل 7 تست LOD و LOQ برای ناخالصیها
جدول 7 دادههای تست LOD و LOQ برای ناخالصیها
|
ترکیب
|
غلظت (میلیگرم بر لیتر)
|
نسبت سیگنال به نویز
|
ارتفاع پیک (میکرو ثانیه)
|
نویز (میکرو ثانیه)
|
LOD نظری (میلیگرم بر لیتر)
|
LOQ نظری (میلیگرم بر لیتر)
|
| سیانامید |
0.25 |
20.436 |
0.057 |
0.006 |
0.037 |
0.122 |
| دی سیان دی آمید |
0.05 |
74.434 |
0.206 |
0.006 |
0.002 |
0.007 |
| گلیسین |
2 |
27.124 |
0.075 |
0.006 |
0.221 |
0.737 |
3.6 کروماتوگرامهای محتوای نمونه و تست تکرارپذیری
شکل 8 کروماتوگرامهای 8 تزریق متوالی از نمونه افزودنی خوراک رقیق نشده
جدول 8 دادههای تست برای نمونه افزودنی خوراک رقیق نشده
|
نام نمونه
|
آنالیت
|
وزن نمونه (گرم)
|
حجم نهایی (میلیلیتر)
|
نتیجه (میلیگرم بر لیتر)
|
محتوا (گرم بر کیلوگرم)
|
زمان ماند انحراف معیار نسبی (%)
|
مساحت پیک (میکرو ثانیه*ثانیه) انحراف معیار نسبی (%)
|
| افزودنی خوراک |
سیانامید |
0.2 |
1000 |
تشخیص داده نشد |
تشخیص داده نشد |
/ |
/ |
| دی سیان دی آمید |
0.2 |
1000 |
0.099 |
0.495 |
0.397 |
0.44 |
| گلیسین |
0.2 |
1000 |
تشخیص داده نشد |
تشخیص داده نشد |
/ |
/ |
شکل 9 کروماتوگرامهای 8 تزریق متوالی از نمونه افزودنی خوراک رقیق شده 10 برابر
جدول 9 دادههای تست برای نمونه افزودنی خوراک رقیق شده 10 برابر
|
نام نمونه
|
آنالیت
|
وزن نمونه (گرم)
|
حجم نهایی (میلیلیتر)
|
ضریب رقیقسازی
|
نتیجه (میلیگرم بر لیتر)
|
محتوا (گرم بر کیلوگرم)
|
زمان ماند انحراف معیار نسبی (%)
|
مساحت پیک (میکرو ثانیه*ثانیه) انحراف معیار نسبی (%)
|
| نمونه افزودنی خوراک رقیق شده 10 برابر |
گوانیدینو استیک اسید |
0.2 |
1000 |
10 |
18.61 |
930.5 |
0.083 |
0.637 |
4. نتیجهگیری
در این مطالعه، از سیستم کروماتوگرافی یونی Wayeal برای تعیین محتوای گوانیدینو استیک اسید و ناخالصیهای مرتبط در افزودنیهای خوراک استفاده شد. این روش امکان کمیتسنجی دقیق آنالیتهای هدف در افزودنیهای خوراک را فراهم میکند و میتواند تأیید کند که آیا افزودن آنها با مقررات اداری خوراک و افزودنیهای خوراک مطابقت دارد یا خیر. این روش با ارائه کنترل دقیق بر محتوای آنالیت، پشتیبانی دادههای فنی را برای شرکتها فراهم میکند.
پیام شما باید بین 20 تا 3000 کاراکتر باشد!
english
français
Deutsch
Italiano
Русский
Español
português
Nederlandse
ελληνικά
日本語
한국
العربية
हिन्दी
Türkçe
indonesia
tiếng Việt
ไทย
বাংলা
فارسی
polski
