تعیین آنالوگ هایدروکسی متیونین در مواد غذایی با کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا Wayeal

متیونین هیدروکسی آنالوگ (MHA) یک افزودنی اسید آلی است که به طور گسترده ای در صنعت مواد غذایی به عنوان جایگزینی متیونین استفاده می شود. MHA به طور گسترده ای در مواد غذایی مرغ (برویلرز و لایه ها) استفاده می شود.خوک ها (خنزیر بچه ها و خوک های نهایی)، گاوهای شیرخوار و گاوهای گوشت خور) و آبزی پروری (ماهی و میگو) به عنوان جایگزینی برای متیونین اثرات قابل توجهی را در کاهش هزینه های خوراک نشان می دهد.بهبود محیط روده حیوانات، و تقویت ایمنی حیوانات.

کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا همراه با تشخیص UV به دلیل کارایی جداسازی عالی آن، برای تجزیه و تحلیل نمونه های مختلف خوراکی پیچیده مناسب است.مقاومت قوی در برابر تداخل ماتریس، حساسیت تشخیص بالا، و نتایج کمی پایدار و قابل اعتماد.این آزمایش مطابق با استاندارد "تعیین آنالوگ هیدروکسی متینین در مواد غذایی با کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا" انجام شده است (GB/T 19371-2025). A Wayeal LC3400 series high performance liquid chromatograph equipped with a UV detector was employed to validate the sample pretreatment procedure and the liquid chromatographic separation and detection system، که امکان شناسایی کیفی و تجزیه و تحلیل کمی دقیق آنالوگ هایدروکسی متینین را در انواع مختلف نمونه های خوراک فراهم می کند.

کلمات کلیدی: خوراک؛ متینین هیدروکسی آنالوگ؛ کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا.

1ابزارها و عوامل

1.1 لیست پیکربندی HPLC

جدول 1 لیست پیکربندی سیستم کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا

1.2 فهرست واکنش ها و استانداردهای مرجع

جدول ۲: فهرست واکنش ها و استانداردهای مرجع

1.3 شرایط کروماتوگرافی مایع

جدول 3 شرایط کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا

1.4 مواد آزمایشی و تجهیزات کمکی

پاک کننده فوق صوتی؛

مخلوط کننده گرد و غبار؛

سانتریفیوژ با سرعت بالا؛

ترازو تحلیلی

شاکر

2روش تجربی

2.1 آماده سازی محلول

2.1.1 راه حل های منحنی استاندارد:

مقدار مناسبی از استاندارد مرجع متینین هیدروکسی آنالوگ را با دقت وزن کنید و آن را در 10٪ استونیتریل حل کنید تا مجموعه ای از محلول های استاندارد را در غلظت های جرم 0 آماده کنید.5، 1.0، 2.0، 50، 100، 200، 400، و 800μ5 میلی لیتر از هر محلول استاندارد را به طور جداگانه به لوله های آزمایش 15 میلی لیتری منتقل کنید. 0.1 میلی لیتر محلول هیدروکسید پتاسیم 50٪ را به طور دقیق اضافه کنید و برای 15 ثانیه گرد و غبار کنید.سپس به طور دقیق 0 را اضافه کنید.2 میلی لیتر محلول 50٪ اسید فسفوریک، و گرد و غبار برای 15 ثانیه دیگر. سانتریفیوژ در 8000r / min برای 5 دقیقه. از طریق یک فیلتر غشا میکروپوریزه قبل از تجزیه و تحلیل.

2.1.2 محلول های نمونه آزمایش:

5g از نمونه خوراک را در یک ظروف وزن کنید، 50mL از محلول 10٪ استونیتریل را اضافه کنید و برای 30 دقیقه مخلوط کنید. روی یک شیکر قرار دهید و برای 30 دقیقه تکان دهید. در 8000r / min برای 5 دقیقه سانتریفیوژ کنید.و سوپرناتانت را برای استفاده بعدی نگه دارید.. به دقت انتقال 5mL از supernatant بالا به یک لوله آزمایش 15mL stoppered. به دقت اضافه 0.1mL از 50٪ محلول هیدروکسید پتاسیم و گرداب برای 15s. سپس به دقت اضافه 0.2 میلی لیتر محلول 50٪ اسید فسفوریک و گرد و غبار برای 15 ثانیه دیگر. سانتریفیوژ در 8000r / min برای 5 دقیقه. از طریق یک فیلتر غشای میکروپوروس قبل از تجزیه و تحلیل عبور کنید. دو محلول نمونه آزمایش موازی را آماده کنید.

2.1.3 راه حل های آزمایش بازیابی:

۲٫۵ میلی لیتر از ماده فوقانی نمونه و ۲٫۵ میلی لیتر از هر محلول سری استاندارد را به دقت به یک لوله آزمایش ۱۵ میلی لیتری معلق منتقل کنید.1 میلی لیتر محلول 50٪ هیدروکسید پتاسیم و گرد و غبار برای 15 ثانیهسپس 0.2mL از محلول 50٪ اسید فسفری و گرداب را برای 15 ثانیه دیگر اضافه کنید.قبل از تجزیه و تحلیل، سوپرناتنت را از طریق یک فیلتر غشا میکروپوریزه عبور دهید..

3نتیجه آزمایش

3.1 خطی بودن و محدوده

جدول 4 جدول غلظت منحنی استاندارد

شکل 1 منحنی استاندارد آنالوگ هیدروکسی متینین

توجه: مقادیر مناسب از محلول استاندارد مرجع آنالوگ هایدروکسی متیونین گرفته شده و به صورت سریال به مجموعه ای از غلظت ها برای آماده سازی منحنی استاندارد رقیق شده است.محدوده خطي صفر بود.5️80.0μg/mL، و ضریب همبستگی (R) 0 بود.99983، نشان دهنده خطی بودن عالی برای تحلیلگر است.

3.2 دقت

شکل 2 کروماتوگرافی های پوشش داده شده از آزمایش دقیق برای استاندارد مرجع (20.0μg/mL)

جدول 5 داده های آزمایش دقیق برای استاندارد مرجع (20.0μg/mL)

توجه: استاندارد مرجع آنالوگ هایدروکسی متیونین (در غلظت 20.0μتکرار (RSD) زمان حفظ 0.084٪ و منطقه اوج 0.391٪ بود که نشان دهنده دقت ابزار خوب است.

3.3 بازپرداخت

شکل 3 کروماتوگرافی های پوشش داده شده از آزمایش بازیابی آنالوگ هیدروکسی متیونین در مواد غذایی

جدول 6 داده های آزمایش بازیابی آنالوگ هایدروکسی متیونین در مواد غذایی

توجه: نمونه با استاندارد مرجع در غلظت ۴۰ ترکیب شد.0μدر این آزمایش، مقدار آن ها به میزان 88,56% بازیافت شد که نشان دهنده دقت خوب روش است.

3.4 حد تشخیص (LOD)

شکل 4 کروماتوگرام استاندارد آنالوگ هایدروکسی متیونین (2.5μg/mL)

جدول 7 داده های آزمایش برای استاندارد مرجع آنالوگ هایدروکسی متیونین (2.5μg/mL)

توجه: بر اساس داده های آزمایش استاندارد مرجع آنالوگ هایدروکسی متیونین در 2.5μg/mL همانطور که در جدول بالا نشان داده شده است، حد نظری تشخیص (LOD) به 0 محاسبه شده است.033μg/mL در نسبت سیگنال به نویز 3 (S/N = 3).

3.5 آزمایش یک نمونه خوراک

شکل 5 کروماتوگرافی یک نمونه خوراک

توجه: متینین هیدروکسی آنالوگ در یک نمونه خوراک در غلظت 0 شناسایی شد.402μg/mL

4نتیجه گیری

این آزمایش مطابق با استاندارد "تعیین آنالوگ هیدروکسی متیونین در مواد غذایی با کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا" (GB/T 19371-2025) انجام شده است.با استفاده از کروماتوگراف مایع با عملکرد بالا سری Wayeal LC3400 مجهز به یک آشکارساز UVنتایج تجربی نشان داد که قله هدف نشان دهنده تقارن خوب و تعداد پلات نظری بالا در محدوده غلظت 0.5️80.0μg/mL، ضریب ارتباط (R) بالاتر از 0 بود.9998مقادیر RSD برای زمان نگهداری و منطقه اوج استاندارد مرجع MHA (20.0μدر نمونه های خوراک، مقدار MHA در 40 درصد افزایش یافت.0μg/mL 88.56% بود که دقت روش خوب را نشان می دهد. حد تشخیص نظری (LOD) برای MHA 0 بود.033μMHA با موفقیت در یک نمونه خوراک در غلظت 0 شناسایی شد.402μتمام داده های فوق با الزامات روش داروسازی برای عملکرد ابزار مطابقت دارند.