این یادداشت کاربردی تعیین چندین فسفات در غذاها را طبق روش 2 GB 5009.256-2025 با استفاده از سیستم کروماتوگرافی یونی Wayeal معرفی می کند.
مصرف بیش از حد فسفات ممکن است متابولیسم کلسیم-فسفر بدن را مختل کند و منجر به اختلال در جذب مواد معدنی یا سایر مشکلات سلامتی شود. تشخیص دقیق به شرکتها کمک میکند تا استفاده از افزودنیها را بهطور علمی کنترل کنند، کیفیت و ایمنی غذا را متعادل کنند، و پشتیبانی دادهها را برای بهینهسازی فرمولها فراهم میکنند.
کلمات کلیدی:کروماتوگرافی یونی، آنیون ها، مواد غذایی.
1. ابزار و Regents
1.1 فهرست پیکربندی کروماتوگراف یونی
جدول 1 فهرست پیکربندی ابزار
|
خیر
|
مدولار
|
تعداد
|
|
1
|
کروماتوگراف یونی IC6200 با آشکارساز رسانایی
|
1
|
|
2
|
نمونه گیری خودکار AS3100
|
1
|
|
3
|
ایستگاه کاری کروماتوگرافی SmartLab CDS 2.0
|
1
|
|
4
|
HS-9A-PP 4.0*250mm
|
1
|
1.2 معرف ها و استانداردها
جدول 2 فهرست معرف ها و استانداردها
|
خیر
|
معرف ها و استانداردها
|
خلوص
|
|
1
|
یون فسفات در آب (1000 میلی گرم در لیتر)
|
1000 میلی گرم در لیتر
|
1.3 آزمایش مواد و تجهیزات کمکی
فیلتر هیدروفیل نوع سرنگ کنسرو شده (0.45μm)
انژکتور (20 میلی لیتر)
2. روش آزمایش
2.1 پیش تصفیه نمونه
1-2 گرم (با دقت 0.001 گرم) از نمونه را در یک لوله رنگ سنجی 50 میلی لیتری وزن کنید. 22.5 میلی لیتر محلول 100 میلی مول در لیتر هیدروکسید سدیم اضافه کنید. ورتکس را به مدت 1 دقیقه مخلوط کنید، سپس در دمای 80 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه با اولتراسونیک استخراج کنید و هر 5 دقیقه تکان دهید تا از پراکندگی کامل نمونه اطمینان حاصل شود. پس از خنک شدن تا دمای اتاق، با آب فوق خالص تا 50 میلی لیتر رقیق شده و کاملاً مخلوط کنید. کل محلول را به یک لوله سانتریفیوژ 50 میلی لیتری منتقل کنید و با سرعت 8000 دور در دقیقه به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ کنید. 5 میلیلیتر از مایع رویی را در لوله رنگسنجی 50 میلیلیتری دیگر اندازهگیری کنید، 1 میلیلیتر اسید نیتریک 30 درصد اضافه کنید و ورتکس کنید تا مخلوط شود. لوله را در یک حمام آب در دمای 90 قرار دهید درجهسی± 5 درجهC و 60 دقیقه حرارت دهید. پس از گرم شدن، لوله را خارج کرده و در یک حمام آب سرد تا دمای اتاق خنک کنید. در نهایت با آب رقیق شده و خوب مخلوط کنید.
2 میلی لیتر از محلول را در لوله سانتریفیوژ 10 میلی لیتری پیپت کنید، سپس با آب فوق خالص تا نقطه رقیق کنید. لوله را در سانتریفیوژ یخچال قرار دهید و در 4 سانتریفیوژ کنید درجهC و 8000 r/min به مدت 5 دقیقه. مایع رویی را جمع آوری کرده و از 0.45 عبور دهیدμغشای فیلتر متر. سپس، حجم مناسبی از فیلتر را برای آنالیز ابزاری بگیرید.
نکته: در روش استاندارد اصلی، 45 میلی لیتر محلول هیدروکسید سدیم 50 میلی مول در لیتر به طور جداگانه اضافه می شود. برای این آزمایش، برای تسهیل تنظیم حجمی به دلیل مقدار بیشتر میخ، محلول استخراج به 22.5 میلی لیتر از محلول هیدروکسید سدیم 100 میلی مول در لیتر به طور جداگانه اضافه شد. این اصلاح بر اعتبار نتایج تجربی تأثیری ندارد.
2.2 شرایط آزمایش
جدول 3 شرایط آزمایش آنیون ها
|
ستون
|
HS-9A-PP، 4.0 × 250 میلی متر
|
|
شوینده
|
30mmol/L KOH (ایزوکراتیک)
|
|
نرخ جریان
|
1 میلی لیتر در دقیقه
|
|
زمان عملیات
|
30 دقیقه
|
|
حجم تزریق
|
100 میکرولیتر
|
|
دمای ستون
|
30 درجه سانتی گراد
|
|
دمای سلول
|
35 درجه سانتی گراد
|
|
جریان سرکوبگر
|
90 میلی آمپر
|
3. نتیجه آزمایش
3.1 کروماتوگرافی استاندارد
تعیین چندین فسفات در غذا طبق روش 2 GB 5009.256-2025 در مدت 30 دقیقه تکمیل شد. نتایج آزمایش خطی بودن و تکرارپذیری خطی خوب، محدودیتهای عالی تشخیص و کمیسازی، دقت رضایتبخش، تکرارپذیری نمونه قوی، موازیسازی نمونه قابل اعتماد، تکرارپذیری نمونههای ثابت و نرخ بازیابی عالی را نشان داد. همه شاخص های عملکرد الزامات مشخص شده در GB 5009.256-2025 برای تعیین چند فسفات در مواد غذایی را برآورده می کنند.
کروماتوگرام همپوشانی منحنی استاندارد
3.2 محدوده خطی
برای تهیه منحنی کالیبراسیون مقدار مناسبی از محلول استاندارد گرفته و رقیق کنید. انحراف بین نتایج تشخیص خطی و غلظت های شناخته شده کمتر از حداکثر انحراف مجاز بود، با مقدار R بیشتر از 0.999، که نشان دهنده خطی بودن عالی برای هر جزء است.
جدول 4 جدول محدوده خطی یون فسفات
|
یون تحلیلی
|
محدوده خطی
|
ضریب همبستگی خطی (R)
|
|
یون فسفات
|
0.05-20 میلی گرم در لیتر
|
0.99971
|
نتایج خطی برای یون فسفات
3.3 آزمون تکرارپذیری خطی
کروماتوگرام تست تکرارپذیری برای منحنی استاندارد نقطه کم ارزش S1 با 7 تزریق متوالی
کروماتوگرام های تست تکرارپذیری برای منحنی استاندارد نقطه با ارزش متوسط S4 با 7 تزریق متوالی
کروماتوگرام تست تکرارپذیری برای منحنی استاندارد نقطه با ارزش بالا S7 با 7 تزریق متوالی
داده های تست تکرارپذیری برای منحنی کالیبراسیون
|
نام مرکب
|
یون فسفات
|
|
نقطه منحنی استاندارد
|
زمان نگهداری (دقیقه) RSD (%)
|
منطقه اوج (μS*s) RSD(%)
|
|
S1
|
0.482
|
0.687
|
|
S4
|
0.133
|
0.342
|
|
S7
|
0.492
|
0.755
|
3.4 تست LOD
کروماتوگرام تست LOD
داده های تست LOD
|
مرکب
|
غلظت (mg/L)
|
SNR
|
ارتفاع قله (μS)
|
نویز (μS)
|
LOD نظری (mg/L)
|
LOD نظری (g/kg)
|
LOQ نظری (mg/L)
|
LOQ نظری (گرم بر کیلوگرم)
|
|
یون فسفات
|
0.01
|
13.793
|
0.005
|
0.001
|
0.0022
|
0.003
|
0.0073
|
0.009
|
3.5 تست دقیق
کروماتوگرام های همپوشانی دو آزمایش مستقل
داده های تست دقیق
|
نام مرکب
|
غلظت (mg/L)
|
میانگین (mg/L)
|
تفاوت مطلق
|
درصد (%)
|
|
یون فسفات
|
3.403
|
3.402
|
0.002
|
0.06
|
|
3.401
|
3.6 کروماتوگرام آزمایشی نمونه خالی
کروماتوگرام آزمایشی نمونه خالی
داده های آزمون نمونه خالی
|
نام مرکب
|
غلظت (mg/L)
|
نسبت سیگنال به نویز (S/N)
|
ارتفاع قله (μS)
|
نویز (μS)
|
|
یون فسفات
|
0.013
|
15.330
|
0.013
|
0.002
|
3.7 نمونه کروماتوگرام تست موازی و تکرارپذیری
کروماتوگرام های روکش نمونه موازی میگو منجمد 1 (8 تزریق)
کروماتوگرام های همپوشانی میگوی منجمد نمونه موازی 2 (8 تزریق)
داده های تست میگوی منجمد
|
نام نمونه
|
غلظت (mg/L)
|
وزن نمونه (گرم)
|
حجم رقیق (ml)
|
فاکتور رقیق سازی
|
نتیجه (گرم بر کیلوگرم)
|
میانگین (گرم بر کیلوگرم)
|
تفاوت مطلق (%)
|
درصد (%)
|
RSD زمان نگهداری (دقیقه) (%)
|
RSD منطقه اوج (μS*s) (%)
|
|
نمونه موازی میگو منجمد 1
|
2.836
|
1.7365
|
50
|
50
|
4.064
|
4.057
|
0.015
|
0.37
|
0.097
|
0.934
|
|
نمونه موازی میگو منجمد 2
|
2.622
|
1.6108
|
50
|
50
|
4.049
|
0.088
|
0.515
|
3.8 نمونه تست اسپکینگ و تکرارپذیری سنبله
کروماتوگرام همپوشانی 50% میگوی منجمد منجمد (8 تزریق)
داده های تست تکرارپذیری برای میگوی منجمد 50 درصد سطح سنبله
|
مرکب
|
یون فسفات
|
|
شماره سریال
|
زمان نگهداری (دقیقه)
|
منطقه اوج (μS*s)
|
|
1
|
16.493
|
148.225
|
|
2
|
16.523
|
148.582
|
|
3
|
16.543
|
148.628
|
|
4
|
16.557
|
148.806
|
|
5
|
16.556
|
149.562
|
|
6
|
16.573
|
148.875
|
|
7
|
16.585
|
149.009
|
|
8
|
16.593
|
148.798
|
|
میانگین
|
16.553
|
148.811
|
|
RSD (%)
|
0.2
|
0.259
|
کروماتوگرام های همپوشانی میگو منجمد با 100% سطح سنبله (8 تزریق)
داده های تست تکرارپذیری برای میگوی منجمد با 100% سطح سنبله
|
نام مرکب
|
یون فسفات
|
|
شماره سریال
|
زمان نگهداری (دقیقه)
|
منطقه اوج (μS·s)
|
|
1
|
16.517
|
191.367
|
|
2
|
16.527
|
190.92
|
|
3
|
16.542
|
190.963
|
|
4
|
16.52
|
191.291
|
|
5
|
16.533
|
191.519
|
|
6
|
16.511
|
191.187
|
|
7
|
16.535
|
191.535
|
|
8
|
16.538
|
191.435
|
|
میانگین
|
16.528
|
191.277
|
|
RSD (%)
|
0.066
|
0.124
|
کروماتوگرام های همپوشانی میگوی منجمد با 150 درصد سطح سنبله (8 تزریق)
داده های تست تکرارپذیری برای میگوی منجمد با سطح سنبله 150٪
|
مرکب
|
یون فسفات
|
|
خیر
|
زمان نگهداری (دقیقه)
|
منطقه اوج (μS*s)
|
|
1
|
16.506
|
230.087
|
|
2
|
16.506
|
230.749
|
|
3
|
16.497
|
230.363
|
|
4
|
16.498
|
230.513
|
|
5
|
16.464
|
230.610
|
|
6
|
16.468
|
230.497
|
|
7
|
16.483
|
230.516
|
|
8
|
16.477
|
231.089
|
|
میانگین
|
16.487
|
230.553
|
|
RSD (%)
|
0.101
|
0.126
|
داده های تست اسپکینگ برای میگوی منجمد
|
نام مرکب
|
نوع سنبله
|
غلظت تست (mg/L)
|
حجم نهایی (L)
|
فاکتور رقیق سازی
|
وزن نمونه (گرم)
|
مقدار سنبله (μg)
|
مقدار پس زمینه (μg)
|
بازیابی سنبله (%)
|
|
یون فسفات
|
50 درصد سنبله
|
4.187
|
0.05
|
50
|
1.6905
|
3600
|
6790
|
102.15
|
|
یون فسفات
|
100% اسپایک
|
5.382
|
0.05
|
50
|
1.5948
|
7200
|
6790
|
92.57
|
|
یون فسفات
|
150% اسپایک
|
6.488
|
0.05
|
50
|
1.6250
|
10000
|
6790
|
94.30
|
بر اساس داده های ارائه شده، پیک های کروماتوگرافی شکل خوبی را نشان می دهند و ضرایب همبستگی خطی همگی بزرگتر از 0.999 هستند. تعیین فسفات در مواد غذایی با استفاده از ستون کروماتوگرافی هیدروژن-هیدروکسید NovaChrom (HS-9A-PP، 4 × 250mm، 9μm)، با اشاره به روش دوم مشخص شده در GB5009.256-2025 برای تعیین چندین فسفات در مواد غذایی انجام شد. نتایج تجربی نشان می دهد که روش دوم خطی بودن و تکرارپذیری خطی عالی را نشان می دهد. همچنین محدودیت تشخیص برجسته (0.003g/kg)، حد کمیت (0.009g/kg) و دقت را نشان میدهد. این روش تکرارپذیری خوب، موازی بودن نمونهها و نرخ بازیابی اسپیک عالی را نشان میدهد. هر دو حد تشخیص و حد کمی کمتر از الزامات استاندارد 0.05g/kg و 0.1g/kg هستند. RSD نواحی اوج برای تکرارپذیری نمونه از 0.515٪ تا 0.934٪ متغیر بود. تفاوت مطلق بین دو تعیین مستقل به دست آمده در شرایط تکرارپذیری برای نمونه 0.37٪ از میانگین حسابی بود. تحت آزمایش دقیق، تفاوت مطلق بین دو تعیین مستقل به دست آمده در شرایط تکرارپذیری 0.06٪ از میانگین حسابی بود که از نیاز استاندارد 15٪ تجاوز نمی کند. نرخ بازیابی از 92.57٪ تا 102.15٪ متغیر بود. این روش با الزامات GB5009.256-2025 برای تعیین چند فسفات در غذا مطابقت دارد.
4. نتیجه گیری
این تجزیه و تحلیل با استفاده از کروماتوگرافی یونی Wayeal برای تعیین چندین فسفات در مواد غذایی طبق روش 2 از GB5009.256-2025 انجام شد. این روش، کمیت دقیق محتوای فسفات در مواد غذایی را امکان پذیر می کند و مطابقت آن با استانداردهای ملی (مانند GB 5009.256-2025) را تأیید می کند. این امر به جلوگیری از فراتر رفتن محدودیتهای مجاز افزودنی توسط شرکتها کمک میکند و از یکپارچگی سیستمهای نظارتی ایمنی مواد غذایی پشتیبانی میکند.
پیام شما باید بین 20 تا 3000 کاراکتر باشد!
english
français
Deutsch
Italiano
Русский
Español
português
Nederlandse
ελληνικά
日本語
한국
العربية
हिन्दी
Türkçe
indonesia
tiếng Việt
ไทย
বাংলা
فارسی
polski
