تعیین باقیمانده آنتی‌بیوتیک‌های کینولون در گوشت مرغ توسط سیستم طیف‌سنجی جرمی کروماتوگرافی مایع LCMS-TQ9200 Wayeal (LC-MS/MS)
استاندارد ملی ایمنی مواد غذایی چین "GB 31650-2019 محدودیت‌های باقیمانده حداکثر برای داروهای دامپزشکی در مواد غذایی" محدودیت‌های باقیمانده حداکثر (MRLs) برخی از آنتی‌بیوتیک‌های کینولون را در محصولات غذایی مشتق شده از حیوانات مشخص می‌کند. علاوه بر این، "GB 31658.17-2021 استاندارد ملی ایمنی مواد غذایی - تعیین باقیمانده‌های تتراسایکلین‌ها، سولفونامیدها و کینولون‌ها در مواد غذایی با منشاء حیوانی توسط کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنجی جرمی پشت سر هم" روش تحلیلی LC-MS/MS و محدودیت‌های کمی‌سازی (LOQs) مربوطه را برای 13 آنتی‌بیوتیک کینولون مشخص می‌کند. این یادداشت کاربردی نتایج با موفقیت تأیید شده را برای تجزیه و تحلیل 13 باقیمانده آنتی‌بیوتیک کینولون در گوشت مرغ با استفاده از سیستم طیف‌سنجی جرمی کروماتوگرافی مایع سه‌گانه چهار قطبی LCMS-TQ9200 Wayeal (LC-MS/MS) ارائه می‌دهد.
کلمات کلیدی:LC-MS/MS، کینولون‌ها، باقیمانده‌های دارویی دامپزشکی، ایمنی مواد غذایی.
سیستم طیف‌سنجی جرمی کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنجی جرمی پشت سر هم Wayeal LCMS-TQ9200
روش کروماتوگرافی مایع
ستون کروماتوگرافی: C18 3.0x100mm
فاز متحرک: A: 0.1٪ اسید فرمیک متانول، B: محلول 0.1٪ اسید فرمیک
سرعت جریان: 0.4mL/min
دمای ستون: 45°C
حجم تزریق: 3μL
روش طیف‌سنجی جرمی
جدول 1 پارامترهای منبع یون طیف‌سنجی جرمی
| منبع یون |
ESI، حالت یون مثبت |
| ولتاژ منبع یون |
5500V |
| سرعت جریان گاز غیرفعال‌سازی |
18000mL/min |
| سرعت جریان گاز نبولایزر |
2000mL/min |
| سرعت جریان گاز پرده |
5000mL/min |
| سرعت جریان گاز برخورد |
800μL/min |
| دمای غیرفعال‌سازی |
450°C |
| دمای گاز پرده |
150°C |
جدول 2 پارامترهای طیف‌سنجی جرمی برای هر ترکیب
| محدوده خطی |
Q1 |
Q3 |
پتانسیل جداسازی (V) |
انرژی برخورد (V) |
| 111.26 |
262.1 |
244* |
100 |
25 |
| 160 |
100 |
50 |
| 59.64 |
262.1 |
202 |
115 |
44 |
| 244.1* |
115 |
24 |
| 70.16 |
320.1 |
302.1* |
90 |
27 |
| 233.2 |
90 |
33 |
| 23.74 |
321.2 |
234 |
100 |
38 |
| 303* |
100 |
30 |
| 37.91 |
332.2 |
231 |
100 |
49 |
| 288 |
100 |
25 |
| 28.70 |
334.1 |
316* |
110 |
29 |
| 233.2 |
110 |
35 |
| 48.54 |
352.1 |
265.1* |
110 |
31 |
| 334 |
110 |
29 |
| 105.74 |
358.1 |
340.1* |
100 |
32 |
| 283.1 |
100 |
32 |
| 35.97 |
360.2 |
316.1 |
110 |
27 |
| 245.1* |
110 |
38 |
| 51.67 |
362.1 |
318.3 |
75 |
25 |
| 261.2* |
75 |
34 |
| 190.11 |
363.2 |
72.1* |
100 |
25 |
| 345.2 |
100 |
29 |
| 38.11 |
386.1 |
299.1* |
110 |
38 |
| 342 |
110 |
27 |
| 25.85 |
400.2 |
299.1 |
110 |
38 |
| 382.2 |
120 |
30 |
توجه: یون علامت‌گذاری شده با * یون کمی است
1. نتیجه آزمایش
1.1 شکل پیک
تعیین 13 آنتی‌بیوتیک کینولون در عرض 11 دقیقه تکمیل شد. همه پیک‌ها شکل پیک خوبی داشتند و پدیده دنباله‌داری رایج آنتی‌بیوتیک‌های کینولون را نداشتند. همه ترکیبات پاسخ‌های سیگنال قوی را نشان دادند و الزامات کمی‌سازی تجربی را برآورده کردند.شکل 1 کروماتوگرام 13 آنتی‌بیوتیک کینولون
1.2. محدوده خطی
مقدار مناسبی از محلول استاندارد مخلوط کینولون به طور متوالی رقیق شد تا استانداردهای کالیبراسیون با غلظت‌های 2 تا 500 نانوگرم در میلی‌لیتر تهیه شود. ارزیابی خطی بودن، توافق عالی با غلظت‌های اسمی را نشان داد، با تمام انحرافات در محدوده خطای مجاز. ضریب تعیین (R²) از 0.9921 تا 0.9998 متغیر بود که خطی بودن رضایت‌بخش را برای همه اجزا تأیید می‌کند.
جدول 3 جدول محدوده خطی
ترکیبات
| محدوده خطی |
ضریب همبستگی خطی R |
2اسید اکسولینیک |
| 111.26 |
0.9973 |
سیپروفلوکساسین |
| 59.64 |
0.9973 |
نورفلوکساسین |
| 70.16 |
0.9973 |
انوکساسین |
| 23.74 |
0.9973 |
سیپروفلوکساسین |
| 37.91 |
0.9973 |
پفلوکساسین |
| 28.70 |
0.9973 |
لومفلوکساسین |
| 48.54 |
0.9973 |
دانوفلوکساسین |
| 105.74 |
0.9973 |
انروفلوکساسین |
| 35.97 |
0.9973 |
افلوکساسین |
| 51.67 |
0.9973 |
ماربوفلوکساسین |
| 190.11 |
0.9973 |
سارافلوکساسین |
| 38.11 |
0.9973 |
دیفلوکساسین |
| 25.85 |
0.9973 |
شکل 2 نتایج محدوده خطی برای آنتی‌بیوتیک‌های کینولون انتخاب شده |
1.3. حد تشخیص (LOD) و حد کمی‌سازی (LOQ)
استاندارد ملی ایمنی مواد غذایی GB 31658.17-2021، حد تشخیص (MDL) 2μg/kg و حد کمی‌سازی (MQL) 10μg/kg را مشخص می‌کند. در این روش، تمام ترکیبات هدف نسبت سیگنال به نویز به طور قابل توجهی بیشتر از 3 در 2μg/kg و 10 در 10μg/kg نشان دادند که کاملاً با الزامات حساسیت مشخص شده در استاندارد ملی مطابقت دارد.
جدول 4 نسبت سیگنال به نویز برای حدود تشخیص و کمی‌سازی ترکیبات هدف
ترکیب
| SNR (S/N) |
2μg/kg |
| 10μg/kg |
اسید اکسولینیک |
| 111.26 |
359.11 |
فلومکین |
| 59.64 |
244.73 |
نورفلوکساسین |
| 70.16 |
392.57 |
انوکساسین |
| 23.74 |
80.26 |
سیپروفلوکساسین |
| 37.91 |
99.26 |
پفلوکساسین |
| 28.70 |
125.81 |
لومفلوکساسین |
| 48.54 |
165.84 |
دانوفلوکساسین |
| 105.74 |
348.10 |
انروفلوکساسین |
| 35.97 |
120.82 |
افلوکساسین |
| 51.67 |
287.26 |
ماربوفلوکساسین |
| 190.11 |
399.38 |
سارافلوکساسین |
| 38.11 |
160.79 |
دیفلوکساسین |
| 25.85 |
149.29 |
شکل 3 کروماتوگرام‌های LOD/LOQ برای کینولون‌های انتخاب شده |
1.4. آزمایش دقت
یک محلول استاندارد مخلوط از آنتی‌بیوتیک‌های کینولون در سه غلظت (10، 50 و 100 نانوگرم در میلی‌لیتر) برای 6 بار تزریق شد تا زمان ماند و تغییرات مساحت پیک مقایسه شود. همانطور که در جدول زیر نشان داده شده است، تمام ترکیبات کینولون آزمایش شده انحراف زمان ماند کمتر از 0.3٪ و انحراف مساحت پیک کمتر از 5٪ را نشان دادند که کاملاً با الزامات استاندارد ملی RSD ≤15٪ برای دقت مطابقت دارد.
جدول 5 آزمایش دقت ترکیبات مختلف
شکل 4 کروماتوگرام‌های دقت ترکیبات انتخاب شده
2. نتیجه‌گیری
این روش از سیستم طیف‌سنجی جرمی کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنجی جرمی پشت سر هم Wayeal LCMS TQ9200 برای تعیین آنتی‌بیوتیک‌های کینولون در نمونه‌های مرغ استفاده کرد. داده‌های تجربی عملکرد کروماتوگرافی عالی را با شکل پیک‌های مشخص و عدم وجود دنباله‌داری برای تمام آنالیت‌ها نشان داد، در حالی که الزامات حساسیت مشخص شده در استانداردهای ملی را برآورده می‌کرد. این روش خطی بودن خوبی را با ضرایب همبستگی (R²) بیش از 0.99 برای تمام منحنی‌های کالیبراسیون، همراه با تکرارپذیری عالی که با انحرافات زمان ماند زیر 0.3٪ و تغییرات مساحت پیک کمتر از 5٪ مشهود است، نشان داد. تجزیه و تحلیل سه دسته نمونه مرغ که به طور مستقل تهیه شده بودند، هیچ باقیمانده قابل تشخیصی از آنتی‌بیوتیک‌های کینولون را نشان نداد. این نتایج تأیید می‌کنند که روش تحلیلی همراه با سیستم Wayeal LC-MS/MS کاملاً قادر به برآورده کردن الزامات تشخیص کیفی و کمی معمول برای آنالیت‌های هدف در نمونه‌های آزمایشی است.
پیام شما باید بین 20 تا 3000 کاراکتر باشد!
