تعیین بقایای رزین در ساپونین های Panax Notoginseng توسط کروماتوگرافی گازی Wayeal GC6100

کروماتوگرافی گازی نقش مهمی در تشخیص باقی مانده های رزین در ساپونین های Panax notoginseng ایفا می کند. Panax notoginsengساپونین ها به عنوان ماده خام اصلی برای داروهای قلبی عروقی و عروق مغزی مانند Xueshuantong عمل می کنند و فرآیند خالص سازی آنها معمولاً از رزین های جذب ماکرو متخلخل استفاده می کند. با این حال، این فرآیند ممکن است بقایای حلال آلی مضر از جمله n-هگزان، بنزن، تولوئن، زایلن، استایرن و دی وینیل بنزن را معرفی کند. این باقی مانده ها به طور بالقوه برای بدن انسان سمی هستند. بنابراین، ایجاد روش های تحلیلی حساس و دقیق برای نظارت دقیق ضروری است.

این مطالعه مطابق با آخرین ویرایش فارماکوپه چینی، با استفاده از کروماتوگرافی گازی فناوری Wayeal GC6100 مجهز به آشکارساز یونیزاسیون شعله (FID) و همراه با یک نمونه‌بر خودکار فضای سر برای تعیین باقیمانده‌های رزین در نمونه‌های ساپونین Panax notoginseng انجام شد.

کلمات کلیدی: ساپونین پاناکس نوتوژنسنگ; حلال های باقی مانده؛ کروماتوگرافی گازی؛ آشکارساز FID؛ فضای اصلی

1. روش آزمایش

1.1 پیکربندی ابزار

جدول 1 فهرست پیکربندی کروماتوگراف گازی

1.2 مواد آزمایشی و تجهیزات کمکی

استانداردهای مرجع: مواد مرجع تایید شده از n-هگزان، بنزن، تولوئن، p-xylene، o-xylene، استایرن، 1،2-دی اتیل بنزن، و محلول های استاندارد دی وینیل بنزن (خریداری شده در داخل)، در ظروف در بسته و در یخچال نگهداری می شوند و از نور محافظت می شوند.

N، N-دی متیل فرمامید؛

گاز حامل: نیتروژن با خلوص بالا.

مولد هیدروژن؛

ژنراتور هوا؛

نمونه‌بردار خودکار فضای اصلی؛

ویال های هد اسپیس: ویال های هد اسپیس شیشه ای (20 میلی لیتر).

1.3 شرایط آزمون

1.3.1 شرایط مرجع برای نمونه برداری فضای سر

دمای فر: 90درجهج

زمان جوجه کشی: 30 دقیقه;

دمای شیر تزریق: 110درجهج

دمای خط انتقال: 120درجهج

حجم تزریق: 1.0 میلی لیتر (حجم حلقه).

1.3.2 شرایط عملیاتی مرجع برای کروماتوگرافی گازی

ستون تحلیلی: ستون مویرگی FFAP، 30 متر×0.25 میلی متر×0.25μمتر

برنامه دما: دمای ستون اولیه 60درجهC به مدت 16 دقیقه نگه داشت، سپس به 200 افزایش یافتدرجهC با نرخ 20درجهC/min، و به مدت 2 دقیقه نگه داشته شد.

سرعت جریان ستون: 1.0 میلی لیتر در دقیقه.

دمای ورودی: 240درجهج

دمای آشکارساز: 300درجهج

سرعت جریان هوا: 300 میلی لیتر در دقیقه؛

سرعت جریان هیدروژن: 40 میلی لیتر در دقیقه.

سرعت جریان آرایش: 20 میلی لیتر در دقیقه.

تزریق اسپلیت با نسبت تقسیم 2:1.

1.4 آماده سازی محلول

1.4.1 تهیه محلول استاندارد مرجع

مقادیر مناسبی از استانداردهای مرجع n-هگزان، بنزن، تولوئن، p-xylene، o-xylene، استایرن، 1،2-دی اتیل بنزن و دی وینیل بنزن را به دقت وزن کرده و در N,N-دی متیل فرمامید حل کنید تا محلولی حاوی 20μگرم در میلی لیتر هر یک از n-هگزان، تولوئن، p-xylene، o-xylene، استایرن، 1،2-دی اتیل بنزن، و دی وینیل بنزن، و 4μگرم بر میلی لیتر بنزن، به ترتیب، به عنوان محلول استاندارد مرجع عمل می کند.

1.4.2 تهیه محلول کاری استاندارد مخلوط

2 میلی لیتر از محلول استاندارد مرجع را با دقت به یک فلاسک حجمی 50 میلی لیتری منتقل کنید، با محلول N,N-دی متیل فرمامید 25 درصد به حجم رقیق کنید و خوب مخلوط کنید. 5 میلی لیتر از این محلول را به طور دقیق به یک ویال 20 میلی لیتری headspace منتقل کنید، مهر و موم کنید و محلول کاری استاندارد مخلوط به دست می آید.

1.4.3 تهیه محلول استاندارد برای تست حد تشخیص

2 میلی لیتر از محلول استاندارد مرجع را با دقت به یک بالن حجمی 500 میلی لیتری منتقل کنید، با محلول N,N-دی متیل فرمامید 25 درصد به حجم رقیق کنید و خوب مخلوط کنید. 5 میلی لیتر از این محلول را به طور دقیق به یک ویال 20 میلی لیتری headspace منتقل کنید، مهر و موم کنید و محلول استاندارد برای آزمایش حد تشخیص به دست می آید.

2. نتیجه و بحث

2.1 تجزیه و تحلیل کیفی استانداردهای مرجع

شکل 1 کروماتوگرام حلال خالی

شکل 2 کروماتوگرام محلول کاری استاندارد مخلوط

جدول 2 پارامترهای کروماتوگرافی محلول کاری استاندارد مخلوط

توجه: کروماتوگرام‌های بالا نشان می‌دهند که تمام پیک‌های کروماتوگرافی به خوبی از یکدیگر جدا شده‌اند، با تفکیک‌پذیری‌های بیشتر از 1.5، که الزامات آنالیز تجربی را برآورده می‌کنند.

2.2 تست تکرارپذیری

شکل 3 کروماتوگرام های روکش شده محلول کاری استاندارد مخلوط برای تست تکرارپذیری (n=5)

جدول 3 پارامترهای کروماتوگرافی محلول کاری استاندارد مخلوط برای تست تکرارپذیری

نکته: محلول کار استاندارد مخلوط به مدت 5 بار به طور مداوم تزریق شد و RSD نواحی پیک≤1.5 درصد

2.3 محدودیت تشخیص

شکل 4 کروماتوگرام محلول استاندارد برای آزمایش حد تشخیص

جدول 4 پارامترهای کروماتوگرافی محلول استاندارد برای آزمایش حد تشخیص

توجه: حد تشخیص (LOD) در نسبت سیگنال به نویز (S/N) 3 و حد کمیت (LOQ) در نسبت سیگنال به نویز (S/N) 10 تعیین شد. هر دو مقدار LOD و LOQ مطابق با الزامات استاندارد بودند.

2.4 تجزیه و تحلیل نمونه

تقریباً 0.1 گرم از هر نمونه (به ترتیب 0.1017 گرم، 0.1026 گرم و 0.1023 گرم) را در ویال های 20 میلی لیتری جداگانه وزن کنید، سپس با دقت 5 میلی لیتر محلول N,N-دی متیل فرممید 25 درصد را به هر ویال اضافه کنید، ببندید و خوب تکان دهید.

شکل 5 کروماتوگرام های روکش شده از سه محلول نمونه

شکل 6 کروماتوگرام های روکش شده محلول نمونه و محلول استاندارد مرجع

توجه: هیچ یک از n-هگزان، بنزن، تولوئن، p-xylene، o-xylene، استایرن، 1،2-دی اتیل بنزن یا دی وینیل بنزن در نمونه ها شناسایی نشد.

3. نتیجه گیری

در این مطالعه، یک کروماتوگرافی گازی Wayeal GC6100 مجهز به آشکارساز یونیزاسیون شعله (FID) و همراه با یک نمونه‌گر خودکار فضای باز برای تعیین باقی‌مانده‌های رزین در نمونه‌های ساپونین Panax notoginseng استفاده شد. نتایج تجربی نشان داد که تمام پیک‌های کروماتوگرافی به خوبی از هم جدا شده‌اند، با تفکیک‌پذیری‌های بیشتر از 1.5، که الزامات مورد نیاز برای اهداف تحلیلی را برآورده می‌کنند. نتایج آزمون تکرارپذیری و محدودیت تشخیص این روش همگی الزامات مشخص شده را برآورده می کند. هیچ یک از n-هگزان، بنزن، تولوئن، p-xylene، o-xylene، استایرن، 1،2-دی اتیل بنزن، یا divinylbenzene در نمونه های آزمایش تشخیص داده نشد، که نشان دهنده نتایج رضایت بخش است. این نتایج نشان می‌دهد که کروماتوگرافی گازی Wayeal GC6100 به طور کامل قادر به برآوردن الزامات تحلیلی برای تعیین باقی‌مانده‌های رزین در نمونه‌های ساپونین Panax notoginseng است.

4. توجه

کلیه عملیات مربوط به تهیه حلال و محلولهای استاندارد و همچنین پیش تصفیه نمونه باید در هود بخار انجام شود. برای جلوگیری از تماس با پوست و لباس باید از تجهیزات حفاظت فردی مناسب مطابق با مقررات ایمنی آزمایشگاه استفاده شود.