رودامین B (همچنین به عنوان Rose Red B یا Basic Violet 10 شناخته می شود) یک رنگ فلورسنت پایه مصنوعی است که متعلق به کلاس شیمیایی زانتین است.این ماده خود دارای رنگ قرمز صورتی روشن است و به راحتی در محلول های قطبی مانند آب و اتانول محلول می شوددر ابتدا، به طور گسترده ای در زمینه های صنعتی از جمله نساجی، چاپ و برچسب گذاری فلورسنت استفاده می شد. به دلیل هزینه پایین و توانایی رنگ بندی قوی،برخی از بازرگانان بی شرمساری به طور غیرقانونی آن را به محصولات غذایی برای رنگ آمیزی اضافه کرده اند، مانند پودر چیلی، دانه های فلفل سیچوان، محصولات گوشت و ادویه جات، که آن را یک آلاینده مهم است که ایمنی مواد غذایی را به خطر می اندازد.
رودامین بی به وضوح برای بدن انسان سمی است. می تواند از طریق دستگاه گوارش یا پوست وارد بدن شود و متابولیسم طبیعی فیزیولوژیکی را مختل کند. علاوه بر این،خطر سرطان زا و موتاژنیک بالقوه دارد.در نتیجه، این ماده به عنوان یک ماده غیر قابل مصرف در مواد غذایی توسط چندین کشور ممنوع شده است.و میزان تشخیص آن در ادویه های مختلف و غذاهای فرآوری شده به طور مداوم بالا است.
در این یادداشت درخواست، a liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for the determination of Rhodamine B in food was established using the WAYEAL LCMS-TQ9200 liquid chromatography-tandem mass spectrometry systemاین روش به استخراج کارآمد، جدایی دقیق و کمیت حساس آنالیت هدف در حالی که به طور موثر تداخلات ماتریس غذایی را از بین می برد، دست می یابد.این برنامه پشتیبانی فنی قابل اعتماد برای غربالگری سریع و کمیت دقیق رودامین B در مواد غذایی ارائه می دهد.، به این ترتیب تسهیل نظارت موثر بر ایمنی مواد غذایی.
کلمات کلیدی: ایمنی مواد غذایی، رودامین B، LCMS/MS
1ابزارها و عوامل
1.1 پیکربندی ابزار
جدول 1 فهرست پیکربندی ابزار
|
نه، نه
|
نام
|
مقدار
|
| 1 |
LCMS-TQ9200 سیستم LCMS/MS |
1 |
| 2 |
P3600B پمپ دوگانه گرادینت فشار بالا |
1 |
| 3 |
CT3600 کوره ستون |
1 |
| 4 |
AS3600 نمونه گیری خودکار |
1 |
| 5 |
سیستم اطلاعات کروماتوگرافی SmartLab CDS 2.0 |
1 |
| 6 |
C18 1.7 μm 2.1 × 50 mm ستون |
1 |
| 7 |
کارتریج استخراج فاز جامد NovaPre MCX (60mg/3 ml) |
چند تا |
1.2 فهرست عوامل و استانداردها
جدول 2 واکنش ها و لیست استاندارد
|
نه، نه
|
واکنش ها و استانداردها
|
مشخصات
|
| 1 |
متانول |
درجه LC-MS |
| 2 |
استونیتریل |
درجه LC-MS |
| 3 |
اسید فورمیک |
درجه LC-MS |
| 4 |
رودامین B |
1000 ppm |
1.3 مواد آزمایشی و تجهیزات کمکی
مخلوط کننده گرداب
سانتریفیوژ با سرعت بالا
تعادل تحلیلی
انبوه کننده فاز جامد (SPE) (با پمپ خلاء)
تبخیر کننده نیتروژن
شیکر مدار
2روش تجربی
2.1 آماده سازی محلول
2.1.1 0.1% اسید فورمیک در آب: 1 میلی لیتر اسید فورمیک را به 500 میلی لیتر آب منتقل کنید، به دقت مخلوط کنید و به حجم نهایی 1000 میلی لیتر با آب برسید.
2.1.2 0.1٪ اسید فورمیک در استونیتریل: 1 میلی لیتر اسید فورمیک را به 500 میلی لیتر استونیتریل منتقل کنید، به دقت مخلوط کنید و با استونیتریل به حجم 1000 میلی لیتر ثابت کنید.
2.1.3 متانول ۵۰٪ در آب: ۵۰۰ میلی لیتر متانول را به دقت به یک کوسه حجم سنج ۱ لیتری منتقل کنید و سپس آن را با آب به حجم ثابت کنید.
2.1.4 متانول 50٪ در آب با 0.1٪ اسید فورمیک: انتقال 1 میلی لیتر اسید فورمیک به 500 میلی لیتر متانول 50٪ در آب، مخلوط به دقت، و رقیق به حجم 1000 میلی لیتر با متانول 50٪ در آب.
2.1.5 5٪ آمونیاک در متانول: 5 میلی لیتر محلول آمونیاک را به یک کوسه حجم 100 میلی لیتر منتقل کنید، به حجم متانول رقیق کنید و به دقت مخلوط کنید.
2.2 پیش پردازش نمونه
2.2.1 برداشت نمونه
با دقت 1g از نمونه پودر چیلی را در یک لوله سانتریفیوژ پلاستیکی 50 میلی لیتر وزن کنید. با دقت 10.0 میلی لیتر محلول مایع 50٪ متانول حاوی 0.1٪ اسید مورچه را اضافه کنید و به خوبی مخلوط کنید.اضافه کردن دو homogenizers سرامیکی، سپس گرد و غبار برای 15 دقیقه در مخلوط کننده گرد و غبار. سانتریفیوژ در 8000 r/min برای 10 دقیقه. انتقال 3mL از supernatant (سطح استخراج) و فیلتر از طریق یک 0.غشای فیلتر 45μm قبل از تصفیه.
2.2.2 تصفیه نمونه
حالت کارتریج NovaPre MCX Solid Phase Extraction (SPE): قبل از استفاده، کارتریج را به ترتیب با 3 میلی لیتر متانول و 3 میلی لیتر آب فعال کنید.
۱٫۰ میلی لیتر عصاره را به دقت به کارتریج NovaPre MCX برای استخراج فاز جامد (SPE) منتقل کنید.و 3 میلی لیتر متانول. تحلیلگر هدف را با 6 میلی لیتر آمونیاک در محلول متانول الود کنید و الود را جمع آوری کنید. الود را تا نزدیک به خشکی در زیر یک جریان نیتروژن در 45 ° C تبخیر دهید. باقی مانده را در 0.5 میلی لیتر از فاز اولیه متحرک، از طریق یک غشاء فیلتر فاز آلی 0.22μm فیلتر کنید و سپس فیلترات را برای تجزیه و تحلیل ابزار تزریق کنید.
2.3 شرایط آزمایش
2.3.1 شرایط HPLC
ستون کروماتوگرافیک: C18، 1.7μm، 2.1*50mm
فاز متحرک: فاز A: 0.1٪ اسید فورمیک در آب؛ فاز B: 0.1٪ اسید فورمیک در استونیتریل
سرعت جریان: 0.4 میلی لیتر/ دقیقه
دمای ستون: 40 °C
حجم تزریق: 1μL.
2.3.2 شرایط طیف سنجی جرم
جدول 3 پارامترهای طیف سنجی جرم ترکیبات
|
نام مرکب
|
یون پیشگام (m/z)
|
یون محصول (m/z)
|
انرژی برخورد (CE)
|
| رودامین B |
443.2 |
399.3* |
59 |
| 443.2 |
351.3 |
80 |
یادآوری: * یون اندازه گیری.
|
نام مرکب
|
یون پیشگام (m/z)
|
یون محصول (m/z)
|
انرژی برخورد (CE)
|
| رودامین B |
443.2 |
399.3* |
59 |
| 443.2 |
351.3 |
80 |
3نتیجه آزمایش
3.1 استاندارد کروماتوگرام
تشخیص رودامین B در عرض 7 دقیقه تکمیل شد. همانطور که در شکل 1 نشان داده شده، پیک ترکیب شکل پیک خوب و پاسخ رضایت بخش را نشان داد.که الزامات تعیین تجربی را برآورده می کند.
شکل 1 کروماتوگرافی رودامین B
3.2 محدوده خطی
مقدار مناسبی از محلول کار استاندارد رودامین B به دقت منتقل و با مرحله اولیه متحرک رقیق شد تا منحنی استاندارد آماده شود. محدوده خطی 0.1 ‰ 10 ng / ml بود.انحراف بین نتایج خطی و غلظت های شناخته شده در محدوده حداکثر انحراف مجاز بود.ضریب تعیین (R2) بیشتر از 0 بود.999، که نشان دهنده خطی بودن خوب است.
شکل 2 منحنی استاندارد رودامین B
3.3 محدوده اندازه گیری و محدوده تشخیص
در این روش، حد تشخیص (LOD) و حد کمی (LOQ) برای رودامین B به ترتیب در 0.1 ng/mL و 0.5 ng/mL تعیین شد.نسبت سیگنال به نویز (S/N) مربوطه در جدول زیر خلاصه شده استنسبت S/N در LOD بیش از 3 و در LOQ بیش از 10 بود.
جدول 4 محدوده اندازه گیری و محدوده تشخیص
|
نام مرکب
|
S/N در LOD (0.1ng/mL)
|
S/N در LOQ (0.5ng/mL)
|
| رودامین B |
65.6 |
126.845 |
شکل 3 نسبت سیگنال به سر و صدا در LOD برای رودامین B (0.1ng/mL)
شکل 4 نسبت سیگنال به سر و صدا در LOQ برای رودامین B (0.5ng/mL)
3.4 تکرار
محلول های استاندارد در سه غلظت (0.5نتایج در جدول زیر نشان داده شده است. انحرافات استاندارد نسبی (RSDs) از زمان حفظ و منطقه اوج برای رودامین B در سطح پایین،متوسط، و غلظت های بالا همگی در حدود 5٪ بودند که الزامات تجربی را برآورده می کنند.
جدول ۵. آزمایش تکرار برای رودامین B در غلظت های پایین، متوسط و بالا
|
مرکب
|
غلظت (ng/mL)
|
سطح اوج RSD (٪)
|
زمان نگهداری RSD (٪)
|
| رودامین B |
0.5 |
2.313 |
0.249 |
| 2 |
1.159 |
0.167 |
| 5 |
2.526 |
0.285 |
شکل 5 کروماتوگرافی از 6 تزریق متوالی از 0.5ng/ml رودامین B
شکل 6 کروماتوگرافی از 6 تزریق متوالی از 2ng/mL رودامین B
شکل 7 کروماتوگرافی از 6 تزریق متوالی از 5ng/ml رودامین B
3.5 بازیافت اوج
نمونه A با یک محلول استاندارد برای افزایش غلظت رودامین B با 2ng / ml اضافه شد. سپس شش تزریق تکرار شده تجزیه و تحلیل شد. بازیابی به دست آمده 105.7٪ با RSD 1.473٪ بود.که معیارهای پذیرش روش را برآورده کند.
3.6 انتقال
پس از تزریق محلول استاندارد 10ng / ml، یک حلال خالی برای ارزیابی انتقال تزریق شد. نتایج در شکل زیر نشان داده شده است.انتقال در خالی کمتر از 10 درصد از پایین ترین استاندارد کالیبراسیون بود (0.1ng/mL) که با الزامات تجربی مطابقت دارد.
شکل 8 کروماتوم خالی ترکیب
3.7 آزمایش نمونه
غلظت رودامین B در نمونه A کمتر از حد تشخیص روش (MDL) بود.
شکل 9 کروماتوگرام رودامین B در نمونه A
4نتیجه گیری
در این مطالعه، یک روش طیف سنجی تاندمی جرم (LC-MS/MS) برای تعیین رودامین B با استفاده از سیستم WAYEAL LCMS-TQ9200 ایجاد شد.داده های به دست آمده نشان داد که این روش لبه های کروماتوگرافیکی با تقارن خوب و بدون دم تولید می کند.، و حساسیت با الزامات تجربی مطابقت داشت. ضریب تعیین (R2) بیشتر از 0 بود.999تکرار پذیری (RSD) در غلظت های پایین، متوسط و بالا در حدود 5٪ بود و انتقال در خالی کمتر از 10٪ از پایین ترین استاندارد کالیبراسیون بود..این نتایج نشان می دهد که این روش، هنگامی که با سیستم WAYEAL LC-MS/MS ترکیب می شود، قادر به پاسخگویی به الزامات تشخیص کیفی و کمی معمول برای تحلیلگرهای هدف است.
پیام شما باید بین 20 تا 3000 کاراکتر باشد!
english
français
Deutsch
Italiano
Русский
Español
português
Nederlandse
ελληνικά
日本語
한국
العربية
हिन्दी
Türkçe
indonesia
tiếng Việt
ไทย
বাংলা
فارسی
polski
