آشکارساز تبخیر نور (ELSD) یک آشکارساز جرم جدید با کاربرد نظری برای هر ترکیبی است که می تواند ذرات گازی را تشکیل دهد.نسخه 2025 داروسازی استفاده از تشخیص تبخیر نور (ELSD) را برای تجزیه و تحلیل و کنترل کیفیت بیش از 100 نوع دارو مشخص می کند.در عمل، ELSD بیشتر به ترکیبات بدون جذب ماوراء بنفش (UV) مانند آستراگالوزید، کربوهیدرات، آمینو گلیسید و کلسترول،اغلب به عنوان یک روش تشخیص مکمل برای UV و فلورسنت استفاده می شودبا این حال، نتایج ELSD تحت تاثیر عوامل متعددی از جمله ترکیب فاز متحرک، غلظت حلال آلی، حالت الوشن و شرایط مهتاب است.برای اطمینان از نتایج دقیق و سازگار تجزیه و تحلیل، ارزیابی تاثیر این عوامل بر نتایج ضروری است.
این مطالعه، با ارجاع به روش تحلیلی برای اسپکتینومایسین هیدروکلوراید از بخش دوم داروسازی 2025 و با توجه به اصول ICH QbD،برای غربالگری و بهینه سازی شرایط تحلیلی از یک طرح تجربی ارتگونال استفاده کرد..
شکل 1 اسپکتینومایسین هیدروکلورید
2ابزار و روش
در این مطالعه، تجزیه و تحلیل کروماتوگرافی با استفاده از سیستم HPLC سری LC3200 Wayeal انجام شد. پیکربندی ابزار شامل یک پمپ گرادینت چهارگانه، یک نمونه گیر خودکار، یک پمپ گرادینت چهارگانه، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاه نمونه گیری اتوماتیک، یک دستگاهیک قطعه ستونکنترل سیستم و جمع آوری / پردازش داده ها با نرم افزار کروماتوگرافی SmartLab 2.0 انجام شد.
جدول 1 شرایط HPLC
| ستون کروماتوگرافی |
Nova Atom PC18 (4.6*250mm، 5μm) |
| فاز متحرک |
0.1مول/لیتر محلول آبی اسید تریفلورو اکتیک |
| سرعت جریان (mL/min) |
0.6 |
| دمای ستون |
35 |
| حجم تزریق (μL) |
20 |
| دمای نوبولیزر ELSD (°C) |
85 |
| دمای تبخیر کننده ELSD (°C) |
80 |
| دمای تشخیص ELSD (°C) |
50 |
| میزان جریان گاز (SLM) |
0.2 |
3آماده سازی محلول
محلول نمونه:محلول اصلی اسپکتینومایسین هیدروکلوراید توسط مشتری با غلظت برچسب شده 10 میلی گرم/ میلی لیتر و خلوص 99.8٪ ارائه شد.
0.1M محلول آبی اسید تریفلورو اکتیک:6.8 میلی لیتر از اسید تری فلورو اکتیک را به دقت به یک بالش حجم 1000 میلی لیتر بیفکند. به علامت با آب تصفیه شده رقیق کنید و به خوبی مخلوط کنید. در نهایت، محلول را از طریق یک فیلتر خلاء فیلتر کنید.فیلتر غشا سلولز 45μm قبل از استفاده.
راه حل های استاندارد:محلول اصلی با آب تصفیه شده رقیق شد تا محلول نمونه را با غلظت 0 آماده کند.15، 0.25، 0.35، 0.50هر محلول سپس قبل از استفاده از یک فیلتر غشا سلولز 0.45μm فیلتر شده است.
4نتایج و بحث
داروسازی چین از شرایط کروماتوگرافی یکسان برای تجزیه و تحلیل مواد مرتبط و محتوای اجزای اصلی تحت ورودی اسپکتینومایسین هیدروکلوراید استفاده می کند.روش می گوید که "دتاکتور می تواند بر اساس شرایط واقعی تنظیم شوددر طول مطالعه، با توجه به ویژگی های ابزار ELSD3260، الزامات روش تجزیه و تحلیل و ادبیات مربوطه،برای بررسی پارامترهای تجربی متعدد از طرح تجربی پلکت-بورمن استفاده شد (جدول 2 و 3)سپس، یک طراحی Box-Behnken (جدول 4) برای بهینه سازی پاسخ منطقه اوج آشکارگر ELSD استفاده شد.
جدول ۲ طرح تجربی پلکت-بورمن
| نه، نه |
میزان جریان ((mL/min) |
دمای ستون ((°C) |
دمای نوبولیزر (°C) |
دمای تبخیرگر (°C) |
دمای تشخیص (°C) |
میزان جریان گاز (SLM) |
خسارت پس از ستون |
| 1 |
0.8 |
35 |
60 |
50 |
50 |
0.4 |
نه |
| 2 |
0.6 |
35 |
50 |
60 |
50 |
0.6 |
نه |
| 3 |
0.6 |
30 |
60 |
60 |
50 |
0.4 |
آره |
| 4 |
0.8 |
30 |
60 |
60 |
40 |
0.6 |
نه |
| 5 |
0.6 |
35 |
60 |
50 |
40 |
0.6 |
آره |
| 6 |
0.8 |
30 |
50 |
50 |
50 |
0.6 |
آره |
| 7 |
0.8 |
35 |
50 |
60 |
40 |
0.4 |
آره |
| 8 |
0.6 |
30 |
50 |
50 |
40 |
0.4 |
نه |
جدول 3 تجزیه و تحلیل ANOVA نتایج تجربی پلاکت-بورمن
| منبع تنوع |
ضریب |
مقدار t |
p-value |
اهمیت |
| نرخ جریان |
-6 تا687 |
- هشت تا10 |
<0.01 |
2 |
| دمای ستون |
0.191 |
0.22 |
0.824 |
6 |
| دمای نوبولیزر (°C) |
5.342 |
6.29 |
<0.01 |
3 |
| دمای تبخیرگر (°C) |
4.135 |
4.87 |
<0.01 |
4 |
| دمای تشخیص (°C) |
0.171 |
0.21 |
0.842 |
7 |
| میزان جریان گاز (SLM) |
- ده تا.381 |
-دوازده23 |
<0.01 |
1 |
| خسارت پس از ستون |
-دو تا559 |
-سه تا02 |
<0.01 |
5 |
همانطور که از جدول 3 مشاهده می شود، میزان جریان گاز، میزان جریان فاز متحرک و جبران پس از ستون اثرات منفی نشان داد. به طور خاص کاهش میزان جریان گاز و میزان جریان فاز متحرک،همراه با غیرفعال کردن تعویض پس از ستون، می تواند پاسخ اوج کروماتوگرافی را افزایش دهد. با این حال، کاهش سرعت جریان فاز متحرک ممکن است منجر به افزایش گسترش اوج و کاهش حساسیت تشخیص شود. بنابراین،سرعت جریان مطابق با روش استاندارد حفظ شد.در حالی که دمای ستون و دمای تشخیص اثرات مثبتی نشان دادند، آنها به طور قابل توجهی ارزش پاسخ را افزایش ندادند.مطالعات بعدی بر بهینه سازی سرعت جریان گاز تمرکز خواهد کرد، دمای نوبولیزر و دمای تبخیرگر.
اثرات سرعت جریان گاز، دمای نبولیزر،و دمای تبخیرگر بر روی ارزش پاسخ با استفاده از یک طرح تجربی Box-Behnken در چارچوب روش شناسی سطح پاسخ بررسی شدطرح تجربی در جدول 4 ارائه شده است.
جدول ۴ طراحی تجربی باکس-بنکن
| نه، نه |
میزان جریان گاز (SLM) |
دمای نوبولیزر (°C) |
دمای تبخیرگر (°C) |
| 1 |
0.15 |
75 |
80 |
| 2 |
0.15 |
85 |
80 |
| 3 |
0.25 |
75 |
80 |
| 4 |
0.25 |
85 |
80 |
| 5 |
0.15 |
80 |
75 |
| 6 |
0.15 |
80 |
85 |
| 7 |
0.25 |
80 |
75 |
| 8 |
0.25 |
80 |
85 |
| 9 |
0.2 |
75 |
75 |
| 10 |
0.2 |
75 |
85 |
| 11 |
0.2 |
85 |
75 |
| 12 |
0.2 |
85 |
85 |
| 13 |
0.2 |
80 |
80 |
The detection conditions for spectinomycin hydrochloride were determined by simulating the peak area variation using response surface methodology (Figure 2) and considering the instrumental parameter ranges: دمای نوبولیزر 85°C، دمای تبخیر کننده 80°C، دمای آشکارگر 50°C و جریان گاز 0.2 SLM.
A. اثر سرعت جریان گاز و دمای تبخیرگر بر منطقه اوج
B. اثر سرعت جریان گاز و دمای نوبولیزر بر منطقه اوج
ج. تاثیر دمای نوبولیزر و دمای تبخیرگر بر منطقه اوج
شکل 2 تغییر در منطقه قله
دقت تزریق
محلول اصلی اسپکتینومایسین هیدروکلوراید به 0.35mg/ml رقیق شد و شش تزریق متوالی در شرایط کروماتوگرافی مشخص شده با کروماتوگرافی ثبت شده انجام شد.انحرافات استاندارد نسبی (RSD٪) از زمان حفظ و منطقه اوج برای اوج کروماتوگرافیک اسپکتینومایسین هیدروکلوراید محاسبه شد.نتایج در جدول 5 نشان داده شده است.
جدول 5 نتایج آزمایش دقت تزریق
| نه، نه |
زمان نگهداری (دقیقه) |
اوج هوا (SU*s) |
| 1 |
7.625 |
259.124 |
| 2 |
7.615 |
245.223 |
| 3 |
7.618 |
270.250 |
| 4 |
7.608 |
237.267 |
| 5 |
7.627 |
254.977 |
| 6 |
7.613 |
255.548 |
| RSD (٪) |
0.09 |
4.49 |
مشخصات خاص
با توجه به دستورالعمل ICH Q2 ((R2) در مورد اعتبارپذیری روش تحلیلی و فصل عمومی فارماکوپ چین 9101 راهنمای اعتبارپذیری روش تحلیلی،روش بهینه شده برای خاصیت تأیید شده است، محدوده خطی، دقت و تکرار پذیری.
آب تصفیه شده و محلول نمونه (0.35 میلی گرم/میل) به طور موازی با کروماتوگرافی ثبت شده تجزیه و تحلیل شدند.نتایج (شکل 3) هیچ اوج کروماتوگرافی در زمان حفظ اسپکتینومایسین هیدروکلوراید در کروماتوگرافی آب تصفیه شده نشان نداد.در حالی که اوج اسپکتینومایسین هیدروکلوراید در محلول نمونه به جدایی خط ابتدایی از قله های مجاور رسید (R > 1.5).
شکل 3 نتایج تحلیلی نمونه اسپکتینومایسین هیدروکلورید (0.35mg/ml)
محدوده خطی
سه نمونه موازی از محلول اصلی اسپکتینومایسین هیدروکلوراید را مطابق با روش استاندارد آماده سازی محلول آماده کنید و آنها را در شرایط کروماتوگرافی تجزیه و تحلیل کنید.و کروماتوگرام ها را ثبت کنیدانجام تجزیه و تحلیل رگرسیون با استفاده از مناطق اوج کروماتوگرافیک و غلظت های مربوطه.
شکل 4 نتایج آزمایش خطی بودن (تغییر داده شده با لاگ در مقابل غیرتغییر داده شده)
با توجه به ادبیات، رابطه بین مقدار پاسخ ELSD و غلظت غیرخطی است.نیاز به تبدیل لوگاریم از هر دو مقدار پاسخ و غلظت قبل از انجام تجزیه و تحلیل رگرسیون [8],9پس از اعمال تبدیل لوگاریتم به داده های تجربی، ضریب همبستگی منحنی رگرسیون خطی بیش از 0 بود.999، که به طور قابل توجهی بهتر از نتیجه به دست آمده بدون تبدیل لوگاریتم است (همانطور که در شکل 4 نشان داده شده است).
دقت و تکرار
محلول اصلی اسپکتینومایسین هیدروکلوراید به غلظت 0 رقیق شد.25، 0.35برای هر غلظت، سه نمونه موازی تهیه شد، تحت شرایط کروماتوگرافی مشخص شده تجزیه و تحلیل شد و کروماتوگرافی ثبت شد.محتوای آن با استفاده از منحنی رگرسیون محاسبه شد.، و بازیافت و تکرار پذیری ارزیابی شد. نتایج در جدول 6 ارائه شده است.
جدول 6 نتایج آزمایش بازیابی
| نه، نه |
مقدار واقعی (mg/ml) |
مقدار محاسبه شده (mg/Ml) |
بازیافت (درصدی) |
بازیافت RSD (٪) |
| 1 |
0.25 |
0.252 |
100.8 |
1.36
|
| 2 |
0.25 |
0.251 |
100.4 |
| 3 |
0.25 |
0.246 |
98.4 |
| 4 |
0.35 |
0.348 |
99.4 |
| 5 |
0.35 |
0.352 |
100.6 |
| 6 |
0.35 |
0.344 |
98.3 |
| 7 |
0.50 |
0.505 |
101.0 |
| 8 |
0.50 |
0.513 |
102.6 |
| 9 |
0.50 |
0.504 |
100.8 |
محدودیت اندازه گیری (LOQ)
محلول اصلی استرتومایسین هیدروکلوراید را به غلظت 12μg/mL رقیق کنید. نمونه را در شرایط کروماتوگرافیک تجزیه و تحلیل کنید و کروماتوگرافی را ثبت کنید.محاسبه نسبت سیگنال به سر و صدا (S/N) از اوج کروماتوگرافیک استرتومایسین هیدروکلوراید و تعیین تکرار آننتایج در جدول 7 نشان داده شده است.
جدول 7 نتیجه آزمایش LOQ
| نه، نه |
SNR |
سطح قله (SU*s) |
سطح اوج RSD (٪) |
| 1 |
15.647 |
3.416 |
8.45
|
| 2 |
10.634 |
2.928 |
| 3 |
15.728 |
3.145 |
| 4 |
12.842 |
3.529 |
| 5 |
14.662 |
3.396 |
| 6 |
11.076 |
3.730 |
نتایج نشان می دهد که بر اساس دستورالعمل ICH S/N > 10،انحراف استاندارد نسبی ناحیه اوج برای این غلظت محلول هیدروکلوراید اسپکتینومایسین شرایط زیر را برآورده می کند:بنابراین، می تواند به عنوان استاندارد محدوده کمی برای اسپکتینومایسین هیدروکلوراید عمل کند.
5نتیجه گیری
بر اساس روش داروسازی، این مطالعه یک روش تحلیلی قابل اعتماد و قوی برای کمی کردن اسپکتینومایسین هیدروکلوراید ایجاد کرد.شرایط آشکارساز تبخیر نور (ELSD) به طور سیستماتیک بهینه شدروش بهینه شده نشان داد ثبات و دقت بهبود یافته، حساسیت تشخیص بالاتر و محدوده خطی رضایت بخش.
آشکارساز ELSD3260 یک آشکارساز دمای پایین و جریان تقسیم شده است که به تازگی طراحی و توسعه یافته است.ارائه یک جایگزین ارزشمند برای ترکیبات فاقد جذب UVدر این مطالعه، استفاده از ELSD3260 برای تجزیه و تحلیل اسپکتینومایسین هیدروکلوراید منجر به مقادیر پاسخ و بازتولید عالی و همراه با افزایش حساسیت تشخیص شد.این یافته ها نشان می دهد که این ابزار برای تجزیه و تحلیل کمی اسپکتینومایسین هیدروکلوراید مناسب است..
پیام شما باید بین 20 تا 3000 کاراکتر باشد!
