به عنوان یک نوکلئوتید، اوریدین 5'-مونوفسفات (UMP) یک واسطه محوری در متابولیسم اسید نوکلئیک در موجودات زنده است. این فراوان‌ترین نوکلئوتید در شیر پستانداران است و نیاز غذایی به اوریدیلات در طول رشد و تکامل فرزندان به طور قابل توجهی بیشتر از سایر نوکلئوتیدها است. در سال‌های اخیر، تحقیقات نشان داده است که UMP نه تنها در متابولیسم انرژی و سنتز RNA شرکت می‌کند، بلکه با تعدیل مسیرهای سیگنالینگ سلولی، عملکرد سد روده را نیز افزایش می‌دهد. علاوه بر این، به طور هم افزایی با ویتامین‌های محلول در چربی برای ارتقای جذب مواد مغذی و عملکرد ایمنی عمل می‌کند. UMP معمولاً به عنوان یک تقویت‌کننده تغذیه‌ای به شیر خشک نوزادان و خوراک دام/طیور اضافه می‌شود، جایی که خلوص و غلظت آن مستقیماً بر ارزش غذایی و ایمنی محصول نهایی تأثیر می‌گذارد.
کلمات کلیدی:تقویت کننده تغذیه مواد غذایی، UMP، نوکلئوتیدها، کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا.
1. ابزار و معرف‌ها
1.1 لیست پیکربندی HPLC
جدول 1 لیست پیکربندی HPLC
| شماره. |
ماژولار |
تعداد |
| 1 |
کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا LC3200 |
1 |
| 2 |
پمپ فشار قوی باینری P3210B |
1 |
| 3 |
آون ستون CT3400 |
1 |
| 4 |
نمونه‌گیر خودکار AS3210 |
1 |
| 5 |
آشکارساز UV3210 UV |
1 |
| 6 |
ایستگاه کاری SmartLab CDS 2.0 |
1 |
| 7 |
Nova Element AQC18 5μm 4.6*250mm |
1 |
1.2 معرف‌ها و استانداردها
جدول 2 لیست معرف‌ها و استانداردها
| شماره. |
معرف‌ها و استانداردها |
خلوص |
| 1 |
5'-مونوفسفات |
96.2% |
| 2 |
اوریدین |
98% |
| 3 |
اوراسیل |
98% |
1.3 مواد آزمایشگاهی و تجهیزات کمکی
تمیزکننده اولتراسونیک
میکسر ورتکس
2. روش و شرایط آزمایش
ستون کروماتوگرافی: Nova Element AQC18, 5μm 4.6x250mm.
3. نتیجه آزمایش
3.1 تست مناسب بودن سیستم
تست مناسب بودن سیستم نشان داد که پیک هدف به خوبی شکل گرفته است، با تعداد صفحه نظری بالا و بدون پیک‌های تداخلی در مجاورت آن، بنابراین تمام الزامات آزمایشگاهی را برآورده می‌کند.
شکل 1 کروماتوگرام محلول کاری استاندارد اوریدین 5'-مونوفسفات
جدول 3 نتایج آزمایش برای محلول کاری استاندارد اوریدین 5'-مونوفسفات
| ترکیب |
زمان بازداری (دقیقه) |
مساحت پیک (mAU*s) |
ارتفاع پیک |
فاکتور دم |
تعداد صفحه نظری |
| UMP |
5.559 |
322.525 |
55.643 |
1.130 |
23689 |
3.2 تست تکرارپذیری
محلول کاری استاندارد اوریدین 5'-مونوفسفات (UMP) شش بار تزریق شد. انحراف استاندارد نسبی (RSD) زمان بازداری 0.085٪ و آن مساحت پیک 0.191٪ بود. هر دو مقدار کمتر از حد مشخص شده 2.0٪ بودند که نشان دهنده انطباق با الزامات آزمایشگاهی است.
شکل 2 کروماتوگرام‌های تست تکرارپذیری اوریدین 5'-مونوفسفات (UMP)
جدول 4 نتایج تست تکرارپذیری برای اوریدین 5'-مونوفسفات (UMP)
| ترکیب |
زمان بازداری (دقیقه) |
مساحت پیک (mAU*s) |
| اوریدین 5'-مونوفسفات |
5.559 |
322.525 |
| 5.559 |
323.013 |
| 5.559 |
323.958 |
| 5.561 |
322.753 |
| 5.568 |
323.072 |
| 5.569 |
322.141 |
| RSD(%) |
0.085 |
0.191 |
3.3 تست نمونه
مساحت پیک محلول کاری استاندارد 5'-اوریدین مونوفسفات (20 میلی‌گرم در لیتر) 322.525 بود، در حالی که مساحت پیک محلول نمونه آزمایشی 274.211 بود. بر اساس روش استاندارد خارجی، مقدار UMP در نمونه 17 میلی‌گرم در لیتر تعیین شد.
شکل 3 کروماتوگرام نمونه آزمایشی
جدول 5 نتایج تست نمونه
| ترکیب |
زمان بازداری (دقیقه) |
مساحت پیک (mAU*s) |
ارتفاع پیک |
SNR |
تعداد صفحه نظری |
| 5'-اوریدین مونوفسفات |
5.568 |
274.211 |
47.321 |
14710.024 |
24266 |
3.4 تست مناسب بودن سیستم برای مواد مرتبط
تست محلول مناسب بودن سیستم برای مواد مرتبط نشان داد که تمام پیک‌های ترکیب به خوبی شکل گرفته‌اند، با تعداد صفحه نظری بالا و تفکیک بیشتر از 2.0، بنابراین الزامات آزمایشگاهی را برآورده می‌کنند.
شکل 4 کروماتوگرام محلول کاری استاندارد اوریدین 5'-مونوفسفات (UMP)
جدول 6 نتایج آزمایش برای محلول کاری استاندارد اوریدین 5'-مونوفسفات (UMP)
| ترکیب |
زمان بازداری (دقیقه) |
مساحت پیک (mAU*s) |
ارتفاع پیک |
فاکتور دم |
تعداد صفحه نظری |
| 5'-اوریدین مونوفسفات |
5.570 |
326.631 |
8.682 |
1.121 |
24708 |
| اوراسیل |
7.097 |
839.625 |
28.844 |
1.033 |
18284 |
| اوریدین |
17.367 |
446.693 |
n.a. |
0.995 |
19136 |
3.5 تست تکرارپذیری نمونه
پس از شش تزریق متوالی از محلول مناسب بودن سیستم، تکرارپذیری زمان بازداری برای 5'-UMP، اوراسیل و اوریدین به ترتیب 0.031٪، 0.058٪ و 0.102٪ بود، در حالی که تکرارپذیری مساحت پیک به ترتیب 0.243٪، 0.134٪ و 0.134٪ بود که الزامات آزمایشگاهی را برآورده می‌کند.
شکل 5 کروماتوگرام تست تکرارپذیری نمونه
جدول 7 نتایج آزمایش برای تکرارپذیری زمان بازداری مواد مرتبط
| ترکیب |
5'-اوریدین مونوفسفات |
اوراسیل |
اوریدین |
| زمان بازداری (دقیقه) |
5.570 |
7.097 |
17.367 |
| 5.573 |
7.092 |
17.371 |
| 5.571 |
7.089 |
17.360 |
| 5.570 |
7.093 |
17.380 |
| 5.570 |
7.091 |
17.363 |
| 5.574 |
7.100 |
17.048 |
| RSD (%) |
0.031 |
0.058 |
0.102 |
جدول 8 نتایج آزمایش برای تکرارپذیری مساحت پیک مواد مرتبط
| ترکیب |
5'-اوریدین مونوفسفات |
اوراسیل |
اوریدین |
| مساحت پیک |
326.631 |
839.625 |
446.693 |
| 326.175 |
841.410 |
447.261 |
| 326.126 |
841.330 |
447.299 |
| 327.412 |
842.394 |
448.319 |
| 327.832 |
841.747 |
447.324 |
| 327.850 |
842.911 |
448.083 |
| RSD (%) |
0.243 |
0.134 |
0.134 |
3.6 تست حساسیت برای مواد مرتبط
نسبت سیگنال به نویز پیک اصلی 5'-UMP در محلول تست حساسیت برای مواد مرتبط به طور قابل توجهی بیشتر از 3 است که الزامات آزمایشگاهی را برآورده می‌کند.
شکل 6 کروماتوگرام محلول تست حساسیت مواد مرتبط
جدول 9 نتایج آزمایش محلول حساسیت مواد مرتبط
| ترکیب |
زمان بازداری (دقیقه) |
مساحت پیک (mAU*s) |
ارتفاع پیک |
SNR |
تعداد صفحه نظری |
| 5'-اوریدین مونوفسفات |
5.573 |
26.797 |
4.638 |
949.156 |
24519 |
3.7 آزمایش مواد مرجع و محلول نمونه مرتبط
مساحت پیک محلول مرجع (17 میلی‌گرم در لیتر) 275.856 بود. مساحت پیک کل ناخالصی‌ها در محلول آزمایشی، به استثنای 5'-اوریدین مونوفسفات، 38.021 بود. محاسبه با روش استاندارد خارجی، مقدار ناخالصی در نمونه 2.343 میلی‌گرم در لیتر است.
شکل 7 کروماتوگرام تست محلول مرجع مواد مرتبط
جدول 10 نتایج آزمایش محلول مرجع مواد مرتبط
| ترکیب |
زمان بازداری (دقیقه) |
مساحت پیک (mAU*s) |
ارتفاع پیک |
SNR |
تعداد صفحه نظری |
| 5'-اوریدین مونوفسفات |
5.572 |
275.856 |
47.414 |
14576.232 |
24512 |
شکل 8 کروماتوگرام تست محلول نمونه مواد مرتبط
جدول 11 نتایج آزمایش برای محلول نمونه مرتبط
| ترکیبات |
زمان بازداری (دقیقه) |
مساحت پیک (mAU*s) |
ارتفاع پیک |
SNR |
تعداد صفحه نظری |
| 1 |
3.847 |
7.952 |
1.412 |
433.935 |
114734.178 |
| 2 |
4.178 |
4.358 |
0.710 |
218.248 |
11310 |
| 5'-اوریدین مونوفسفات |
5.548 |
12576.642 |
1964.994 |
603778.520 |
196687.093 |
| اوراسیل |
7.093 |
218.727 |
26.939 |
8277.393 |
18342 |
| اوریدین |
17.355 |
2810.366 |
145.230 |
44624.340 |
19058 |
4. نتیجه‌گیری
در این آزمایش، با استناد به "GB 1903.69-2024 استاندارد ملی ایمنی مواد غذایی: تقویت‌کننده تغذیه مواد غذایی 5'-اوریدین مونوفسفات،" تجزیه و تحلیل با استفاده از سیستم کروماتوگرافی مایع با کارایی بالای Wayeal LC3200 مجهز به آشکارساز فرابنفش انجام شد. نتایج آزمایش نشان می‌دهد که تست مناسب بودن سیستم شکل پیک‌های خوبی را برای تمام ترکیبات، تعداد صفحه نظری بالا و تفکیک بالای 2.0 نشان داد که الزامات آزمایشگاهی را برآورده می‌کند. تکرارپذیری زمان بازداری برای محلول کاری استاندارد 5'-اوریدین مونوفسفات و مواد مرتبط کمتر از 0.2٪ و تکرارپذیری مساحت پیک کمتر از 0.3٪ بود که نشان‌دهنده تکرارپذیری خوب است. محلول تست حساسیت برای مواد مرتبط نسبت سیگنال به نویز برای پیک اصلی 5'-اوریدین مونوفسفات را به طور قابل توجهی بیشتر از 3 نشان داد که الزامات آزمایشگاهی را برآورده می‌کند. تمام نتایج تست نمونه طبیعی بود. داده‌های فوق الزامات ابزاری مشخص شده در روش استاندارد را برآورده می‌کنند.
پیام شما باید بین 20 تا 3000 کاراکتر باشد!
