?
2026-10-21
نیتروایمیدازول‌ها داروهای مصنوعی ضد باکتری و ضد تک‌یاخته هستند که به طور موثر باکتری‌های بی‌هوازی و تریکومونادها را مهار می‌کنند. زمانی به طور گسترده در دام و آبزی‌پروری برای کنترل عفونت‌های گوارشی و بیماری‌های تک‌یاخته‌ای و بهبود نرخ بقا استفاده می‌شدند. با این حال، داروها و متابولیت‌های والد آنها به وضوح سمی هستند: آنها به سرعت در حیوانات به چندین متابولیت فعال متابولیزه می‌شوند که برخی از آنها بسیار طولانی‌تر از ترکیب والد در بافت باقی می‌مانند.
مطالعات سم‌شناسی نشان می‌دهد که ترکیبات والد نیتروایمیدازول و متابولیت‌های اصلی آنها به طور بالقوه سرطان‌زا، جهش‌زا و ژنوتوکسیک هستند. باقی‌مانده‌ها در غذای مشتق شده از حیوانات از طریق زنجیره غذایی وارد بدن انسان می‌شوند و مصرف طولانی مدت با دوز پایین می‌تواند در خون‌سازی اختلال ایجاد کند، به کروموزوم‌ها آسیب برساند و خطر جهش ژنی را افزایش دهد. بنابراین، چین استفاده از نیتروایمیدازول‌ها را در حیوانات تولیدکننده غذا ممنوع کرده است و هیچ باقی‌مانده‌ای در غذای مشتق شده از حیوانات مجاز نیست، که این امر آزمایش دقیق باقی‌مانده‌ها را برای ایمنی غذا ضروری می‌سازد.
GB 31658.23-2022، استاندارد ملی ایمنی غذا برای باقی‌مانده‌های نیتروایمیدازول در غذای مشتق شده از حیوانات با استفاده از کروماتوگرافی مایع و طیف‌سنجی جرمی پشت سر هم، مبنای قانونی این کار است. این استاندارد شامل داروهای والد و متابولیت‌ها در ماتریس‌های گاوی، گوسفندی و سایر حیوانات است. یک آزمایشگاه آزمایشی به یک گردش کار معتبر برای گوشت خوک نیاز داشت که شامل چهار ترکیب هدف - مترونیدازول، هیدروکسی مترونیدازول، دیمتریدازول و هیدروکسی دیمتریدازول - از جمله متابولیت‌های هیدروکسی که حفظ و یونیزاسیون آنها دشوارتر است، در سطح زیر ppb، با انتقال کم و دقت پایدار در طول توالی تزریق طولانی بود.
| مورد | پیکربندی |
|---|---|
| سیستم LC-MS/MS | Wanyi LCMS-TQ9200 چهارچوب سه‌گانه |
| ستون تحلیلی | C18، 1.6 میکرومتر، 2.1 × 100 میلی‌متر |
| فاز متحرک A | 0.1% اسید فرمیک در آب |
| فاز متحرک B | 0.1% اسید فرمیک در استونیتریل |
| نرخ جریان | 0.3 میلی‌متر در دقیقه |
| دمای ستون | 40 درجه سانتی‌گراد |
| حجم تزریق | 4 میکرولیتر |
| تجهیزات کمکی | حمام اولتراسونیک، میکسر ورتکس، سانتریفیوژ با سرعت بالا، حمام آب، تبخیر کننده نیتروژن، ترازوی تحلیلی |
2 گرم نمونه (با دقت 0.05 گرم) را در یک لوله سانتریفیوژ 50 میلی‌لیتری وزن کنید، 10 میکرولیتر محلول کاری استاندارد داخلی مخلوط 1 میکروگرم در میلی‌لیتر اضافه کنید، به مدت 30 ثانیه ورتکس کنید و 10 دقیقه کنار بگذارید. 15 میلی‌لیتر اتیل استات اضافه کنید، به مدت 2 دقیقه ورتکس کنید و به مدت 5 دقیقه با سرعت 10000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را منتقل کرده و استخراج را یک بار دیگر با 15 میلی‌لیتر اتیل استات تکرار کنید. هر دو عصاره را ترکیب کرده و در حمام آب 25 درجه سانتی‌گراد زیر نیتروژن تا خشکی تبخیر کنید.
باقیمانده را در 5 میلی‌لیتر اسید هیدروکلریک 0.1 مولار حل کنید، به مدت 1 دقیقه ورتکس کنید، 5 میلی‌لیتر ان-هگزان اضافه کنید، به مدت 1 دقیقه تکان دهید و به مدت 5 دقیقه با سرعت 5000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید. لایه هگزان را دور بریزید و مرحله چربی‌زدایی را یک بار دیگر با 5 میلی‌لیتر هگزان تکرار کنید. یک ستون استخراج فاز جامد را با 3 میلی‌لیتر اسید هیدروکلریک 0.1 مولار و 3 میلی‌لیتر متانول شرطی کنید، لایه آبی را بارگذاری کنید، با 3 میلی‌لیتر اسید هیدروکلریک 0.1 مولار بشویید و با 4 میلی‌لیتر متانول شستشو دهید. شستشو را در دمای 35 درجه سانتی‌گراد زیر نیتروژن تا خشکی تبخیر کنید، در 0.5 میلی‌لیتر آب حل کنید، به مدت 1 دقیقه ورتکس کنید و قبل از تزریق فیلتر کنید.
| پارامتر | نتیجه |
|---|---|
| زمان اجرا | چهار آنالیت به همراه استانداردهای داخلی در عرض 8 دقیقه جدا شدند، پیک‌های متقارن، پاسخ قوی |
| خطی بودن | کالیبراسیون تطبیق یافته با ماتریس در غلظت‌های 2، 4، 20، 40، 200 و 400 میکروگرم در لیتر؛ R2 بالاتر از 0.9995 برای هر چهار ترکیب، انحراف کمتر از حد 20% |
| حد تشخیص و حد تعیین مقدار | نسبت سیگنال به نویز بالاتر از 3 در 0.5 میکروگرم بر کیلوگرم و بالاتر از 10 در 1 میکروگرم بر کیلوگرم، مطابق با الزامات حد تشخیص 0.5 میکروگرم بر کیلوگرم و حد تعیین مقدار 1 میکروگرم بر کیلوگرم |
| دقت (n = 6) | RSD کمتر از 6% در غلظت 2 نانوگرم در میلی‌لیتر و کمتر از 3% در غلظت 20 نانوگرم در میلی‌لیتر، در مقابل حد 10% |
| انتقال | تزریق نمونه خالی پس از بالاترین استاندارد 400 نانوگرم در میلی‌لیتر بسیار کمتر از 20% مساحت پیک حد تعیین مقدار |
| بازیابی اسپایک | 61.8% تا 103.35% در غلظت 2 نانوگرم در میلی‌لیتر و 104.35% تا 107.15% در غلظت 20 نانوگرم در میلی‌لیتر، در محدوده الزامات 60% تا 120% |
| نمونه گوشت خوک واقعی | هیچ یک از چهار نیتروایمیدازول شناسایی نشد |
کالیبراسیون تطبیق یافته با ماتریس در عصاره گوشت خوک خالی، سرکوب یون ناشی از ماتریس گوشت را جبران کرده و کمی‌سازی را در سطح ردیابی قابل اعتماد نگه می‌دارد. شکل پیک‌ها خوب و بدون دم بود که تأیید می‌کند استخراج با اتیل استات، چربی‌زدایی با هگزان و پاکسازی SPE، تداخلات را در سطح 1 میکروگرم بر کیلوگرم حذف می‌کنند.
سیستم LC-MS/MS Wanyi LCMS-TQ9200 یک روش معتبر برای چهار باقیمانده نیتروایمیدازول در گوشت خوک تحت GB 31658.23-2022 ارائه داد. پیک‌های متقارن، R2 بالاتر از 0.9995، دقت کمتر از 10%، انتقال ناچیز و بازیابی در محدوده 60% تا 120% نشان می‌دهد که گردش کار الزامات کیفی و کمی روتین برای غربالگری و تأیید داروهای دام ممنوعه را برآورده می‌کند و مبنای فنی قابل اعتمادی برای نظارت بر ریسک ایمنی غذا فراهم می‌آورد.
- اکتساب MRM چهارچوب سه‌گانه، انتخاب‌پذیری لازم را برای تأیید باقی‌مانده‌های ممنوعه در سطح 0.5 میکروگرم بر کیلوگرم در ماتریس گوشت چرب فراهم می‌کند.
- شیمی C18 زیر 2 میکرومتر بر روی ستون 2.1 میلی‌متری با سرعت 0.3 میلی‌متر در دقیقه، چهار آنالیت را در کمتر از 8 دقیقه با مصرف کم حلال تفکیک می‌کند.
- استانداردهای داخلی برچسب‌دار ایزوتوپی، تلفات بازیابی در طول استخراج و SPE را جبران کرده و نتایج را در طول بچ‌ها تثبیت می‌کنند.
- چربی‌زدایی با هگزان قبل از SPE، ستون و ستون تحلیلی را محافظت کرده و عمر مفید را در آزمایشگاه‌های با توان عملیاتی بالا افزایش می‌دهد.
