تعیین 6-متیل کومارین در لوازم آرایشی با کروماتوگرافی مایع
1.1 پیکربندی ابزار
جدول 1 فهرست پیکربندی کروماتوگرافی مایع
| نه، نه | ماژول | مقدار |
| 1 | پمپ دوگانه PB3210 | 1 |
| 2 | CT3400 کوره ستون | 1 |
| 3 | AS3210 نمونه گیری خودکار | 1 |
| 4 | دستگاه UV3210 | 1 |
| 5 | NovaChrom SC18 4.6*250mm، 5μm | 1 |
| 6 | استیشن کاری SmartLab | 1 |
1.2 روش آزمایش
1.2.1 واکنش دهنده ها
جدول ۲: لیست واکنش ها
| نه، نه | ماده های واکنش دهنده | خلوص |
| 1 | متانول | درجه کروماتوگرافی |
| 2 | 6-متیل کومارین | 99 درصد |
| 3 | فوسفات دی هیدروژن آمونیوم | AR |
| 4 | اسید فسفوریک | GR |
1.2.1.1 محلول استاندارد 6-متیل کومارین (1000mg/L): مقدار مناسب 6-متیل کومارین استاندارد را بگیرید.محلول شده و حجم آن را با متانول ثابت کرده و به غلظت 1000mg/L به محلول استاندارد آماده می شود.
1.2.1.2 محلول استاندارد کار 6 متيل کومارين:مقدار مناسب از محلول استاندارد 6-متیل کومارین را در پیپیت قرار دهید و با متانول رقیق کنید تا یک سری منحنی کار با غلظت 0 آماده شود..1mg/L، 0.5mg/L، 1.0mg/L، 3.0mg/L، 5.0mg/L و 10.0mg/L به ترتیب.
1.2.1.3 محلول خنک کننده دی هیدروژن فسفات سدیم: 3.12 گرم دی هیدروژن فسفات سدیم بگیرید، آب را برای حل و رقیق کردن به 1000 میلی لیتر اضافه کنید و pH اسید فسفری را به 3 تنظیم کنید.5.
1.2.2 شرایط کروماتوگرافی
جدول 3 شرایط کروماتوگرافی
| ستون کروماتوگرافی | NovaChrom SC18 4.6*250mm 5μm | ||
| فاز متحرک | A: متانولB: محلول بافر دی هیدروژن فسفات سدیم | ||
| نرخ جریان | 1 میلی لیتر/دقیقه | ||
| دمای ستون | ۳۵ درجه سانتیگراد | طول موج | 275nm |
| حجم تزریق | 10μL | ||
جدول 4 برنامه ی الوشن گرادیانت
| زمان ((دقيقه) | مرحله A | مرحله B |
| 0 | 55 | 45 |
| 11 | 55 | 45 |
| 12 | 90 | 10 |
| 40 | 90 | 10 |
| 41 | 55 | 45 |
| 50 | 55 | 45 |
1.2.3 پیش پردازش نمونه
1g از نمونه را (با دقت 0.001g) در یک بطری حجمی 10 میلی لیتر بردارید، 5mL متانول را اضافه کنید، گرد و غبار کنید و تکان دهید تا نمونه را با محلول استخراج کاملا مخلوط کنید، استخراج فوق صوتی برای 20 دقیقه,به دمای اتاق خنک شده و سپس حجم را با متانول به 10 میلی لیتر ثابت می کند، مخلوط می شود و سپس به لوله های سانتریفیوژ منتقل می شود، در 5000r/min برای 5 دقیقه سانتریفیوژ می شود،و سوپرناتنت از طریق 0 فیلتر شده است.45μm غشای ارگانیک، و سپس آزمایش می شود.
2. نتیجه آزمایش
2.1 مناسب بودن سیستم
شکل 1 کروماتوگرافی استاندارد 10mg/L
جدول 5 داده های آزمایش استاندارد 10mg/L
| ترکیبات | زمان نگهداری | منطقه قله | شماره تیوریک صفحه |
| 6-متیل کومارین | 11.168 | 574.285 | 15854 |
توجه:کروماتوگرام و داده ها نشان می دهد که 6-متیل کومارین دارای شکل پیک خوب است و هیچ پیک دیگری در اطراف پیک هدف وجود ندارد و تعداد صفحه نظری بالا است.که مطابق با الزامات تجربی است.
2.2 منحنی استاندارد
شکل 2 نتیجه آزمایش منحنی استاندارد
توجه: کروماتگرام نشان می دهد که مقدار R ضریب همبستگی منحنی 6-متیل کومارین بالاتر از 0 است.9999، که به الزامات تجربی پاسخ می دهد.
2.3 تکرار
شکل 3 کروماتوگرافی تکرار پذیری 3mg/L استانداردهای 6 تزریق
جدول 6 داده های تکرار پذیری 3mg/L استانداردهای 6 تزریقs
|
6-متیل کومارین |
نه، نه | زمان نگهداری | منطقه قله |
| 1 | 11.159 | 177.710 | |
| 2 | 11.161 | 176.711 | |
| 3 | 11.142 | 177.128 | |
| 4 | 11.152 | 176.985 | |
| 5 | 11.150 | 177.469 | |
| 6 | 11.149 | 177.629 | |
| RSD ((%) | 0.061 | 0.222 |
توجه: با توجه به داده های جدول بالا، RSD تکرار پذیری زمان نگهداری 6-متیل کومارین 0.061٪ و RSD تکرار پذیری منطقه اوج 0.222٪ است.تکرار پذیری خوب است و الزامات تجربی را برآورده می کند.
2.4 حد تشخیص
شکل 4 کروماتوگرام آزمایش 0.02mg/L استاندارد
جدول 7 داده های آزمایش با استاندارد 0.02mg/L
| ترکیبات | زمان نگهداری | منطقه قله | SNR |
| 6-متیل کومارین | 11.153 | 1.208 | 19.296 |
توجه: بر اساس داده های فوق، 3 برابر نسبت سیگنال به سر و صدا به عنوان حد تشخیص محاسبه می شود و مشخص شد که حد تشخیص 6-متیل کومارین 0.004mg/L است.اون به الزامات آزمايشي پاسخ ميده.
2.5 نتیجه آزمایش یک نمونه آرایشی
شکل 5 کروماتوم آزمایشی یک نمونه آرایشی
توجه: 6-متیلکومارین در یک نمونه آرایشی شناسایی نشد.
2.6 توجه
هنگام استفاده از یک سانتریفیوژ با سرعت بالا، مراقب باشید که لوله ها به صورت تقارن قرار گرفته و جرم کل لوله ها در دو طرف مقابل یکسان باشد.
3نتیجه گیری
روش تحلیلی که در این مقاله معرفی شده است، با اشاره به "استانداردهای ایمنی و فنی برای لوازم آرایشی" در تشخیص 6-متیل کومارین،با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا Wayeal سری LC3200 با آشکارساز UVنتیجه آزمایش نشان می دهد که شکل قله 6-متیل کومارین در آزمایش سازگاری سیستم خوب است و قله های دیگری در اطراف قله هدف وجود ندارد.و عدد پلاتين نظري بالاست، که نیازهای تجربی را برآورده می کند. مقدار ضریب ارتباط منحنی R بالاتر از 0 است.9999RSD تکرار پذیری زمان حفظ 6-متیل کومارین 0.061٪ و RSD تکرار پذیری منطقه اوج 0.222٪ است که تکرار پذیری خوبی را نشان می دهد..004mg/L. تمام نتایج آزمایش بالا مطابق با الزامات دستگاه در روش استاندارد است.
